SUPER Green I 核酸染料（電泳級）

SUPER Green I 核酸染料（電泳級）

SUPER Green I使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）

（1） 制膠時(shí)加入SUPER Green I 核酸染料。冷卻膠至50℃左右，每100mL膠中加入3～5μL

SUPER Green I 核酸染料。

（2） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳即可。

注：此方法染色可以準(zhǔn)確確定核酸片段分子量，染料用量相對較少。1mL染料大約可以做300塊 100mL的膠。

2．點(diǎn)染法

（1） 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

（2） 工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SUPER Green I 稀釋100倍，即為SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置2～8℃保存一個(gè)月以上。

（3） 制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

（4） 樣品染色：向分析樣品中加入SUPER Green I 工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SUPER Green I 與樣品中DNA充分結(jié)合。SUPER Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5～1/10。

（5） DNA Marker染色：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μLSUPER Green I 工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SUPER Green I 與DNA充分結(jié)合。

（6） 上樣、電泳：按常規(guī)操作。

注：用點(diǎn)染法染色時(shí)，靈敏度較高，染料用量少。但大片段稍有滯后現(xiàn)象，如果需要更準(zhǔn)確確定分子量（與Marker對比），建議使用膠染法。

3．泡染法

（1） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

（2） 用pH 7.0～8.5 的緩沖液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000﹕1的比例稀釋SUPER Green I 濃縮液，混勻，制成染色溶液。

（3） 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10～30分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆蓋整個(gè)膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

注：用泡染法染色時(shí)，可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中多的。

4.  點(diǎn)染＋膠染法

此法結(jié)合方法1和方法2，靈敏度較高，對于低濃度樣本比EB檢測更靈敏。

幾種染色方法特點(diǎn)比較

SUPER Green I 核酸染料（電泳級）（10,000× DMSO溶液）用注意事項(xiàng)：（效果同SYBR Green I）

（1） 在SUPER Green I點(diǎn)染法中，電泳時(shí)間不要超過2小時(shí)，否則SUPER Green I會從DNA上分離出來，會產(chǎn)生彌散狀條帶。

（2） 用點(diǎn)染方法染色時(shí)，條帶稍有滯后現(xiàn)象，如果需要確定片段精確分子量（與Marker對比），建議使用膠染法（方法1）。

（3） 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SUPER Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。

（4） 如果想對用 SUPER Green I 染過的膠進(jìn)行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%～0.3% 的SDS。

（5） 在紫外照射下，與雙鏈 DNA 接合的 SUPER Green I呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。

（6） SUPER Green I對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。