蛋白含量(SP)試劑盒(BCA法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(BCA法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(BCA法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書 (貨號：WS8140F 分光法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介： BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單，快速，耐去污劑（最多 5％）的檢測蛋白質(zhì)濃度 的方法。由于蛋白質(zhì)能將 Cu2+還原成 Cu+；BCA 可與 Cu+結(jié)合生成紫藍(lán)色復(fù)合物，在 562nm 處有光吸光值，顏色的深淺與蛋白含量成正比，因此可根據(jù)吸光值測定蛋白質(zhì)濃度。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑 A 液體 50mL×2 瓶 4℃保存 依據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，臨用前試劑 A:B=50:1 的比例混勻成反應(yīng) mix 試劑 B 液體 2mL×1 支 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、移液器。 四、蛋白含量測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水） 冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定，如 10 倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 ② 細(xì)菌或細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定，如 10 倍。實(shí)驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 ③ 液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 562 nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 反應(yīng) mix 置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min（僅煮一次即可）。 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（只做一次） 樣本 20 蒸餾水 20 反應(yīng) mix 800 800 混勻，于 60℃保溫 30min，全部轉(zhuǎn)移到 1mL 玻璃比色皿 中，于 562nm 處測定吸光值 A，△A= A 測定-A 空白。 【注】：若△A﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0687x - 0.0006；x 是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量：μg，y 是△A。 2、Cpr (mg/g 鮮重)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =0.728×(△A+0.0006) ÷W×D 3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷V1×D=0.728×(△A+0.0006)×D 4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=1.46×(△A+0.0006)×D V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.02mL； W---樣本質(zhì)量：g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，萬。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（500μg/mL）。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 2.5,5, 25, 50, 250, 500. μg/mL。也可根據(jù)實(shí) 際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測定管加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。