總蛋白酶活性試劑盒,微板法

總蛋白酶活性試劑盒,微板法

總蛋白酶活性試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 總蛋白酶試劑盒說明書 (貨號：WS3121W 微板法 48 樣) 一、產品簡介： 蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物進行測定。各種蛋白酶均可水解天然底物 酪蛋白因此由酪蛋白測得的活力是蛋白酶的總活力。 本試劑盒利用總蛋白酶催化水解偶氮酪蛋白，生成的產物于 366nm 有光吸收，通 過測定吸光值的變化得出總蛋白酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存條件 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 再加13mL的蒸餾水混勻備用。 試劑二 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 36mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。 四、總蛋白酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離心 10min， 取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌/細胞樣本：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或 細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；4℃×12000rpm 離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 366nm。 ② 所有試劑解凍至室溫或于 25℃水浴鍋中孵育 20min。 ③ 在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 120 120 試劑一 120 試劑二 120 120 混勻，30℃孵育 60min 試劑三 360 360 試劑一 120 立即混勻，低溫（放冰上）靜置 5min；室溫 12000rpm 離心 5min，直接取 200μL 至 96 孔板中，于 366nm 處讀 值。ΔA=A 測定-A 對照(每個樣本做一個自身對照)。 【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可以延長 30℃孵育時間 T（如延長至 90min）或增加樣本取樣 質量 W（如增至 0.2g），則改變后的反應時間 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、按樣本鮮重計算： 定義：每克組織每小時反應體系中變化 1 個吸收單位定義為 1 個偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/g 鮮重)=ΔA÷1÷(W×V1÷V)÷T=8.3×ΔA÷W 2、按樣本蛋白濃度計算： 定義：每毫克組織蛋白每小時反應體系中變化 1 個吸收單位定義為 1 個偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/mg prot)=ΔA÷1÷(V1×Cpr)÷T=8.3×ΔA÷Cpr 3、按細菌/細胞數量計算： 定義：每 104個細菌/細胞每小時反應體系中變化 1 個吸收單位為 1 個偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/104 cell)=ΔA÷1÷(500×V1÷V)÷T=0.02×ΔA÷Cpr 4、按照液體體積計算： 定義：每毫升液體每小時反應體系中變化 1 個吸收單位定義為 1 個偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/mL)=ΔA÷1÷V1÷T=8.3×ΔA V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.12mL； W---樣本質量，g； T---反應時間，60min=1h； 500---細胞數量，萬； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。