土壤錳過氧化物酶(S-Mnp)試劑盒,微板法

土壤錳過氧化物酶(S-Mnp)試劑盒,微板法

土壤錳過氧化物酶(S-Mnp)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤錳過氧化物酶（S-Mnp）試劑盒說明書 （貨號：WS0330W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 錳過氧化物酶（EC1.11.1.13，Mnp）是真菌分泌的一種糖基化的胞外蛋白，含亞鐵血紅 素的過氧化物酶，主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌這兩個擔子真菌中，屬于木 質素降解酶系，能有效的降解木質素及廢水和環境中其他一些抗性物質，如腐殖質酸和包 括多環芳烴在內的多種有機污染物等。 土壤錳過氧化物酶（S-Mnp）在 Mn2+存在的條件下，將二甲氧基*酚（DMP）氧化生成 的產物在 470nm 處有特征吸收峰。通過檢測該產物在 470nm 處的增加速率，即可得到 Mnp 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×1 瓶 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部，再加 8mL 無水乙醇溶解備用。 試劑三 粉劑×1 瓶 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部，再加 3mL 蒸餾水充分溶解備用。 試劑四 液體×1 支 4℃保存 用前甩幾下使液體落入底部，準備 三個新的 EP 管：每管中加入 2µL 液體，再加 1mL 蒸餾水混勻備用。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、可調式移液器、天平、恒溫震蕩培養箱。 四、土壤錳過氧化物酶（S-Mnp)活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： 1 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 470nm。 2 所有試劑至常溫狀態。 3 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 200 340 試劑二 140 試劑三 20 20 試劑四 40 40 充分混勻，30℃震蕩反應 2h 后，于 12000rpm，4℃離心 10min， 取 200μL 于 96 孔板中，讀取 470nm 處吸光值 A，△A=A 測定管 - A 對照管（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】若△A 值較低，可加大土壤樣本量或者延長反應時間，則改變后的樣本質量 W 和反應時間本試劑盒僅供科研使用 2 T 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 酶活性定義：每克土壤每天氧化 1nmol 的 DMP 所需酶量為一個酶活力單位。 S-MnP 活性(nmol/d/g 土樣)=(△A÷ε÷d)×109×V÷W÷T=174.5×△A÷W ε---DMP 被氧化的產物的摩爾消光系數：55000L/mol/cm； d---96 孔板光徑，0.5cm； V---反應總體積，4×10-4 L； W---樣本質量，g； T---反應時間，2h=1/12d