土壤α-木糖苷酶試劑盒,微板法

土壤α-木糖苷酶試劑盒,微板法

土壤α-木糖苷酶試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤α-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase）測定試劑盒說明書 （貨號：WS3330W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一類木聚糖降解水解酶，存在于微生物等生物體，促使非 還原末端α-D-木糖殘基的水解，釋放出α-D-木糖。 土壤中α-木糖苷酶催化對硝基*酚-α-D-木糖苷產生對硝基*酚（PNP），該產物在 405nm 處有特征吸收峰，通過測定 405nm 光吸收增加速率，即可計算土壤α-木糖苷酶活 性。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 再加 1.4mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液 22mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、天平、低溫離心機、蒸餾水。 四、土壤α-木糖苷酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本的制備： 取新鮮土樣風干或者 37℃烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一（μL） 25 蒸餾水 25 試劑二（μL） 55 55 混勻， 45℃振蕩反應 30min 試劑三（μL） 220 220 混勻，12000rpm，離心 10min，取上清液 200μL 于 96 孔板中，405nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測定- A 對照（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 過小，可以增加土樣量或延長保溫時間（如：60min 或更長），重新調整的 樣本量 W 和反應時間 T 需代入計算公式重新計算。 2.若 A 測定超過 1.5，可以減少土樣量或降低保溫時間（如：10min），重新調整的 樣本量 W 和反應時間 T 需代入計算公式重新計算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y=0.2647x-0.0058；x 為標準品質量（μg），y 為吸光值ΔA。 2、單位定義：每小時每克土樣中產生 1μg 對-硝基*酚（PNP）定義為一個酶活力單位。 土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土樣)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W T---反應時間，30min=0.5h； W---實際稱取干土質量，g； PNP 相對分子質量---139.11。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在 EP 管加入：20μL 標準品+5μL 蒸餾水+55μL 試劑二+220μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據結果制作標準曲線。