土壤磷酸二酯酶(S-PDE)試劑盒,微板法

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)試劑盒,微板法

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性測定試劑盒說明書 (貨號:WS0430W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC 3.1.4.1）是在土壤磷酸單酯酶之后的的第二大磷酸酶。 其在土壤有機磷的循環代謝中起到重要作用。 本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的的檢測方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化 雙(4-硝基苯)磷酸酯 （BNPP）生成黃色的產物 PNP，該產物在 405nm 處有吸收峰。 通過檢測 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-PDE 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 120mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×6 支 4℃保存 臨用前每支甩幾下或離心使粉劑落入 底部，每支再加 4mL 蒸餾水充分溶解， 現配先用，兩天內用完。 試劑三 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋或恒溫培養箱、天平、可調式移液器。 四、土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性測定： 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 405 nm。 ② 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 試劑一 500 500 試劑二 100 37℃（水浴鍋或恒溫培養箱）振蕩反應 1 h 試劑三 400 400 試劑二 100 混勻，12000rpm 室溫離心 5min，立即取上清液 200μL 于 96 孔板中，立 即于 405nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測定- A 對照（參考注意事項）。 【注】：1.若 A 測定超過 1.5，可對最后一步的待檢測上清液(測定管和對照管)同時進行稀釋（用水稀釋即 可），稀釋倍數 D 代入計算公式； 2.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質量 W（如 增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 3.若同時檢測同一背景下的土壤樣本，此批土壤樣本可做做三次樣本自身對照管（取平均值作為 這批土壤樣本的對照管），節省時間；若是不同背景下的土壤樣本（如黑土，紅土，黃土等）， 則每個樣本需做一個自身對照，即按照說明書加樣表操作即可，本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0127x - 0.01；x 是 PNP 摩爾質量（nmol）， y 是△A。 2、活性定義：在 37℃，每克土壤每小時水解 BNPP 產生 1nmol PNP 定義為 1 個酶活單位。 S-PDE(nmol/h/g 土樣)=[(△A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(△A+0.01)÷W×D W---土壤樣品質量，g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； T---催化反應時間，1 h； PNP 相對分子質量---139.11。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10μmol/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解， 若有結晶析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根據實際樣本 來調整標準品濃度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 標準品+590μL 試劑一+400μL 試劑三，混勻，立即取上 清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下讀取吸光值 A。 4 根據結果制作標準曲線。