蛋白含量(SP)試劑盒,微板法

蛋白含量(SP)試劑盒,微板法

蛋白含量(SP)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書 (貨號：WS8140W 微板法 196 樣) 一、產品簡介： BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單，快速，耐去污劑（最多 5％）的檢測蛋白質濃度 的方法。由于蛋白質能將Cu2+還原成Cu+；BCA可與Cu+結合生成紫藍色復合物，在562nm 處有光吸光值，顏色的深淺與蛋白含量成正比，因此可根據吸光值測定蛋白質濃度。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑 A 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 依據實驗用量，臨用前試劑 A:B=50:1 的比例混勻成反應 mix 試劑 B 液體 1mL×1 支 4℃保存 標準品 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫水浴鍋、移液器和蒸餾水。 四、蛋白含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水） 冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定，如 10 倍。實驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 ② 細菌或細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定，如 10 倍。實驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 ③ 液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min，調節波長到 562 nm。 ② 反應 mix 置于 60℃水浴預熱 30 min（僅煮一次即可）。 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（只做一次） 樣本 5 蒸餾水 5 反應 mix 200 200 混勻，于 60℃保溫 30min，全部轉移到 96 孔板， 于 562nm 處測定吸光值 A，△A= A 測定-A 空白。 【注】：若△A﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.188x - 0.0046；x 是標準品質量（μg），y 是△A。 2、Cpr (mg/g 鮮重)=[(△A+0.0046)÷0.188×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =1.06×(△A+0.0046) ÷W×D 3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0046)÷0.188×10-3]÷V1×D=1.06×(△A+0.0046)×D 4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=2.13×(△A+0.0006)×D V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.005mL； W---樣本質量：g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 500---細菌或細胞總數，萬。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（500μg/mL）。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0,100, 200, 300, 400, 500. μg/mL。也可根據實 際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。