土壤中性磷酸酶(S-NP)試劑盒,微板法

土壤中性磷酸酶(S-NP)試劑盒,微板法

土壤中性磷酸酶(S-NP)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤中性磷酸酶（S-NP）試劑盒說明書 (貨號：WS6030W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 土壤磷酸酶對土壤磷素的有效性具有重要作用，是評價土壤磷素生物轉化方向和強度的 指標，也與土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的關系。 本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的檢測方法。在中性環境中，土壤中性磷酸酶（S-NP） 催化磷酸對硝基苯酯（pNPP）生成黃色的產物 PNP，該產物在 405nm 處有吸收峰。 通過檢測 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到土壤中性磷酸酶活性的大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 瓶 4℃保存 每瓶臨用前加 10mL 試劑一充分溶解， 一周內用完。 試劑三 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫培養箱、天平、可調式移液器、蒸餾水、甲苯。 四、土壤中性磷酸酶（S-NP）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 405 nm。 ② 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管 （只做一次） 土樣 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 甲苯 10 10 10 試劑一 290 490 290 試劑二 200 200 混勻， 37℃（水浴鍋或恒溫培養箱）振蕩反應 1h 試劑三 300 300 300 混勻，12000rpm 室溫離心 10min，取 200μL 上清液轉移至 96 孔 板中，于 405nm 下讀取各管吸光值 A，△A=A 測定-A 對照-A 空 白（每個測定管需設一個對照管）。 【注】：1.最后一步檢測時，若有結晶析出，需要 37℃復溶再讀取吸光值。 2.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加 土樣質量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 3.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）。本試劑盒僅供科研使用 2 則改變后 T 需代入計算公式重新計算。或對最后一步的待檢測上清液（包括測定管、對照管 和空白管）同時用蒸餾水進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。 4.若同時檢測一大批同一背景下土壤樣本（如都是黃土，黑土，紅土，黃土等），可做三次樣 本自身對照管（取平均值作為這批土壤樣本的對照管），可從稱樣到檢測步驟節省檢測時間。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0139x + 0.0005；x 是 PNP 摩爾質量（nmol），y 是△A。 2、定義：每克土壤每小時水解 PNPP 產生 1nmol 對硝基*酚（PNP）為一個酶活單位。 S-NP(nmol/h/g 土樣)=[(△A-0.0005)÷0.0139]÷W÷T×D=71.9×(△A-0.0005)÷W×D W---土壤樣品質量，g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； T---催化反應時間，1h； PNP 相對分子質量---139.11。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10μmoL/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解， 若有結晶析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmoL/mL。也 可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 標準品+490μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據結果制作標準曲線。