土壤脫氫酶(S-DHA)試劑盒,微板法

土壤脫氫酶(S-DHA)試劑盒,微板法

土壤脫氫酶(S-DHA)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤脫氫酶（Soil dehydrogenase, S-DHA）試劑盒說明書 (貨號：WS7030W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 土壤脫氫酶的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對有機物的降解活性，以評價降解性能。傳 統方法是用氯化三苯基四氮唑（TTC）作為脫氫酶的氫受體，但生成的有色物質甲臜是不溶于水以至操作 麻煩，且靈敏度低；本試劑盒提供一種簡單，靈敏，快速的測定方法，利用改性的氮四唑鹽作為氫受體， 其生成的黃色甲臜物質易溶于水，于 460nm 測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格試劑名稱 保存要求 試劑一 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、篩子、天平、恒溫培養箱或水浴鍋、低溫離心機。 四、土壤脫氫酶的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備：取新鮮土樣過 40 目篩網，備用。 2、測定步驟： ① 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 460 nm。 ② 在 EP 管內依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管 鮮土 0.1g 試劑一 60 60 試劑二 640 640 劇烈混勻幾次，37℃（水浴鍋或恒溫培養箱）避光培養 4h（中間隔段時間 晃動幾下），12000rpm 離心 5min，取 200μL 上清液轉移到 96 孔板中， 460nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】1.注意觀察，隨著反應時間的延長，反應液呈現黃色，酶活性越大，黃色越深。 2.若同時檢測不同背景下的土壤樣本（如黑土，紅土，黃土等），則需增加樣本自身對照管， 即空白管變為對照管（0.1g 鮮土+700μL 試劑二），△A=A 測定-A 對照。 3.對于活性較高的樣本，若培養 4 小時，A 值測定超過 2 以上，可縮減培養時間（如改為 2 個小時），則改變后的培養時間需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 酶活單位定義：在 37℃時，每克土壤樣品每天催化產生 1μg 甲臜物質為一個酶活性單位。 S-DHA(μg/d/g 鮮土)=(△A÷ε÷d×V1×106×Mr)÷(W×V1÷V2)÷T=169.2×△A÷W ε----甲臜物質的摩爾消光系數，3.1×104 L / mol /cm； V1----96 孔板的檢測總體積，200μL =0.2mL=2×10-4L； d----光徑，0.5cm； V2----EP 管中反應總體積，700μL=0.7mL； T----培養時間，4h=1/6d； W----樣品質量，g； Mr----甲臜物質的分子量，624.47。