纖維素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶試劑盒微板法

纖維素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶試劑盒微板法

纖維素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶試劑盒微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào):WS8030W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 纖維素是植物殘?bào)w進(jìn)入土壤的碳水化合物的重要組分之一。在土壤纖維素酶作用下，可 以催化纖維素水解生成纖維二糖、葡萄糖等還原糖，所以，纖維素酶是碳素循環(huán)中的一個(gè) 重要酶。本試劑盒采用3,5-二硝基水楊酸與終產(chǎn)物還原糖反應(yīng)生成棕紅色物質(zhì)，在540nm 處有特征吸收峰，進(jìn)而得到土壤纖維素酶活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前每瓶加入 55mL 試劑二， 可 80℃水浴，攪拌至溶解，待用。 試劑二 液體 110mL×2 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋或恒溫振蕩培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤纖維素酶（S-CL）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過(guò) 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過(guò)篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 培養(yǎng)：在 EP 管依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣（g） 0.3-0.5 0.3-0.5 試劑一 1000 試劑二 1000 充分混勻，40℃培養(yǎng) 24 小時(shí)（振蕩培養(yǎng)或間隔一段時(shí)間手動(dòng)振 蕩混勻幾下），12000rpm，25℃離心 10min，上清液待用 ② 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)為 540nm。 ③ 顯色反應(yīng)：在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 試劑三 100 100 混勻，95℃水浴 5min，待冷卻后，取 200μL 于 96 孔板中， 在 540nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長(zhǎng) 40℃的孵育時(shí)間 T（如 48 小時(shí)或更長(zhǎng)），或增加土樣質(zhì) 量 W。則改變后的 V1 或土壤重量 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若測(cè)定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1，③歩顯色反應(yīng)步驟中的上清液可用蒸餾 水稀釋，則稀釋倍數(shù) D 代入公式計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 15.161x - 0.0701；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（mg），y 為△A。 2、單位定義：每天每克土樣中產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。 土壤纖維素酶(S-CL)活力(μg/d/g 土樣)=[(ΔA+0.0701)÷15.161×103×(V÷V1)]÷W÷T =329.8×(ΔA+0.0701)÷W V---反應(yīng)總體積，1000μL； V1---顯色反應(yīng)中上清液體積，200μL； T---反應(yīng)時(shí)間，24h=1d； W---土壤樣本實(shí)際取樣量，g。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水（母液需在兩天 內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. mg/mL。也可根據(jù)實(shí) 際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在顯色反應(yīng)階段，按照測(cè)定管加樣表操作，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。