土壤淀粉mei試劑盒,微板法

土壤淀粉mei試劑盒,微板法

土壤淀粉mei試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤淀*酶（Soil Amylase，S-AL）試劑盒說明書 （貨號：WS8130W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 土壤中的淀*酶主要來自于微生物，是一種重要的酶制劑。淀*酶可水解淀粉產生還原 糖，本試劑盒采用 3,5-二硝基水楊酸與終產物還原糖反應生成棕紅色物質，在 540nm 處有 特征吸收峰，進而得到土壤淀*酶活性。 二、測試盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加入 60ml 試劑二,可 80℃水浴， 攪拌至溶解，待用。 試劑二 液體 120mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 12mL×EP 管 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、天平、水浴鍋、低溫離心機、甲苯。 四、土壤淀*酶（S-AL）活性檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或風干土壤，先粗研磨，過 40 目篩網，待測備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 培養：在 EP 管依次加入： 試劑（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 甲苯 40 40 25℃靜置 15min 試劑一 1000 試劑二 1000 充分混勻，37℃培養 1h，12000rpm，25℃離心 10min，上清液待用 ② 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長為 540nm。 ③ 顯色反應：在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 試劑三 100 100 混勻，95℃水浴 5min，待冷卻后，取 200μL 于 96 孔板中， 在 540nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定管-A 對照管。 【注】若△A 在零附近徘徊，可增加土樣質量（如增至 0.2g），或延長培養時間（如增至 3h 或更長）， 則改變后的土樣質量和反應時間 T 代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 2.5454x - 0.0704；x 為標準品質量（mg/mL），y 為△A。本試劑盒僅供科研使用 2、酶活單位定義：每克土樣每小時催化生成 1μg 葡萄糖為一個酶活力單位。 S-AL(μg/h/g 土樣)=[(△A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T =408.6×(△A+0.0704)÷W V---反應總體積，1040μL=1.04mL； T--反應時間，1h； W--土壤樣本實際取樣量，g； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：從標準品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL。 也可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 在顯色反應階段，按照測定管加樣表操作，依據結果即可制作標準曲線。 2