土壤熒光素二乙酸酯FDA水解酶試劑盒微板法

土壤熒光素二乙酸酯FDA水解酶試劑盒微板法

土壤熒光素二乙酸酯FDA水解酶試劑盒微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤熒光素二乙酸酯（Fluorescein diacetate，FDA）水解酶試劑盒說明書 （貨號：WS2230W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶與土壤總碳、全氮、全磷等土壤養分指標間關系密切，與微生物活 性間的相關性比其他酶活性更顯著，同時也能夠很好地反映系統中有機質的轉化和土壤中微生物的活 性，是土壤健康質量的微生物學指標之一。 FDA 是一種無色化合物，在介質中能被許多土壤酶所催化水解，并經脫水反應，產生酶解終產物—熒 光素，該黃色產物在 490nm 處有強吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化即可得出 FDA 水解酶活性。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 110mL×2 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加 6mL 丙酮充分溶解備用 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、丙酮。 四、FDA 水解酶(FDA)活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣風干或 37℃烘箱風干，先粗研磨過 40 目篩備用。 【注】土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 490nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 1000 1000 試劑二 50 丙酮 50 混勻，37℃反應 1h 丙酮 150 150 混勻，12000 rpm 離心 10min，取 200μL 至 96 孔板中， 于 490nm 下讀取吸光值 A，ΔA＝A 測定-A 對照。 【注】：若ΔA 的差值較大，超過 1.5，可以降低土壤取樣量，或者反應產物用蒸餾水稀釋之 后再檢測，則稀釋倍數 D 代入計算公式。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0878x + 0.0094：x 為標準品質量(μg)，y 為ΔA。本試劑盒僅供科研使用 2、活性定義：每小時每克土樣中產生 1μg 熒光素定義為一個酶活力單位。 FDA 活性(μg/h/g)=(ΔA -0.0094)÷0.0878÷W÷T×D=11.39×(ΔA -0.0094)÷W×D T---反應時間，1h； W---土壤樣本實際取樣量； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 熒光素分子量---332.31。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5μmol/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1 mL 丙酮溶解，再加 1 mL 水（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液用試劑一稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.4,0.8 , 1.2, 1.6, 2. μmol/mL。也 可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 按照 20μL 標準品+1mL 試劑一+180μL 丙酮的體系來操作，依據結果即可制作標準 曲線。 2