食品中亞硝酸鹽含量試劑盒,微板法

食品中亞硝酸鹽含量試劑盒,微板法

食品中亞硝酸鹽含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 食品中亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書 （貨號：WS1340W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 在食品中，亞硝酸鹽是肉制品及其他食品加工過程中常用的一種食品添加劑，但是人 體長期攝入亞硝酸鹽過量的食品，產生直接毒害和慢性毒害，因此硝酸鹽的檢測具有特 別重要的意義。 待檢樣經沉淀蛋白質、除去脂肪后，在弱酸條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮 化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，在 540nm 處有特征吸收峰。進而計算得 出亞硝酸鹽含量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液A1 液體 13 mL×1 瓶 4℃保存 提取液A2 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部，再 加 6mL 的蒸餾水充分溶解備用。 提取液A3 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部，先 加 0.18mL 的乙酸，再加 5.82mL 的蒸餾水，溶解備用。 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃避光保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部，再 加 5mL 的 20%鹽酸水溶液（1mL 鹽酸緩慢加入 4mL 蒸餾水中）， 充分溶解備用。 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃避光保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部，再 加 3mL 蒸餾水溶解備用。 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、蒸餾水、天平、常溫離心機、乙酸、鹽酸。 四、食品中亞硝酸鹽含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理 ① 干酪奶酪樣本：稱取約 0.3g 樣本于研缽中，加 1mL 蒸餾水研磨成勻漿后全部轉移 至 2mLEP 管中，再加入 0.04mL 的 3%乙酸溶液（0.3mL 冰乙酸緩慢加入 9.7mL 水 中），最后用蒸餾水定容到 2mL。4℃靜置 20min 后，除去上層脂肪，12000rpm 室 溫離心 10min，取上清液檢測。 ② 液體奶制品：0.5mL 樣本，加入 0.125mL 提取液 A1，混勻后加入 0.6mL 蒸餾水， 沸水浴 15min，冷卻至室溫，加入 0.05mL 提取液 A2，混勻后加入 0.05mL 提取液 A3，混勻，用蒸餾水定容到 2mL，室溫靜置 30min，除去上層脂肪，12000rpm 離心 取上清液檢測。 ③ 其他樣本：稱取約 0.1g 樣本（含水量高可取 0.5）于 2mLEP 管中，加入 0.125mL 提 取液 A1，混勻后加入 1.5mL 蒸餾水，組織研磨機破碎或者用研缽磨碎后再全部轉 移至 2mLEP 管中；沸水浴 15min，冷卻至室溫，加入 0.05mL 提取液 A2，混勻后 加入 0.05mL 提取液 A3，混勻，用蒸餾水定容到 2mL，室溫靜置 30min，除去上層 脂肪，12000rpm 室溫離心 10min，取上清液檢測。 【注】：若高蛋白樣本，提取后上清液依然渾濁，可以減少樣本取樣量 W，或在提取過程中將提取本試劑盒僅供科研使用 2 液 A2 和 A3 分別增加到 0.1mL（不能超過 0.1mL），蒸餾水相應減少。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 540nm。 ② 標準品使用液配制：稱取 2mg 標準品至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水溶解標準 品即 1mg/mL 的亞*酸鈉標準品溶液，再用蒸餾水稀釋 500 倍（1 份母液+499 份蒸 餾水）即 2μg/mL 的亞*酸鈉標準品使用液。 ③ 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管 （僅做一次） 標準管 （僅做一次） 樣本 190 蒸餾水 190 標品使用液 190 試劑一 40 40 40 混勻，室溫（25℃）準確反應 5min 試劑二 20 20 20 混勻，室溫（25℃）準確反應 15min，立即于 540nm 讀取吸光 值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】：最*檢出限：液體乳是 0.06mg/kg；干酪及其他樣本是 1mg/kg。 五、結果計算： 1、液體樣本計算公式： 食品中亞硝酸鹽含量(以亞*酸鈉計)（mg/L）=△A÷(A 標準-A 空白)×C 標×V÷V 樣×D =8×△A÷(A 標準-A 空白)×D 2、固體樣本計算公式： 食品中亞硝酸鹽含量(以亞*酸鈉計)（mg/kg）=△A÷(A 標準-A 空白)×C 標×V÷W×D =4×△A÷(A 標準-A 空白)÷W×D V---提取液總體積，2mL； C 標---標準品濃度，2μg/mL 亞*酸鈉； V 樣---液體樣本取樣檢測體積，0.5mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； W---實際取樣質量，g。