果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 果糖（fructose）含量（間*二酚法）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS5050W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 果糖是一種較為常見(jiàn)的己酮糖，是葡萄糖的同分異構(gòu)體，以游離狀態(tài)大量存在于水果的 漿汁和蜂蜜中。本試劑盒檢測(cè)果糖，是通過(guò)果糖與間*二酚反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在 480nm 下有特征吸收峰，進(jìn)而求得待檢測(cè)樣本果糖含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 30 mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10 mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 臨用前加1mL蒸餾水溶解， 即 1mg/mL 果糖溶液 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、乙醇、蒸餾水。 四、果糖含量的測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 建議：可取兩個(gè)樣本做適當(dāng)梯度的稀釋（如 2-5 倍），確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù) D。 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉(zhuǎn)移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動(dòng)研磨機(jī)可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 ② 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測(cè)，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、 上機(jī)檢測(cè) ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 480nm。 ② 在 EP 管中依次加入下列試劑： 試劑（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 30 標(biāo)準(zhǔn)品 30 蒸餾水 30 試劑一 210 210 210 試劑二 60 60 60 混勻，95℃水浴反應(yīng) 30min（可用封口膜纏緊，以防止水 分散失），冷卻后取 200μL 至 96 孔板中，在 480nm 分別 讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定-A 空白。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：如果ΔA 大于 1，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù) D。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照重量計(jì)算： 果糖含量（mg/g 重量）=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =1.5×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 2、按液體體積計(jì)算： 果糖含量（mg /mL 液體）= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---果糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL； V---加入提取液體積，1.5mL； V1---加入樣本積，0.03mL； W---樣本鮮重，g； D---稀釋倍數(shù)。