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    糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

    更新時間:2024-06-13

    簡要描述:

    糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法
    糖原是由葡萄糖分子通過糖苷鍵聚合而成的高分子物質,作為重要的能源物質儲存于肝 臟、肌肉和腦等重要器官。

    糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

    糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

    本試劑盒僅供科研使用 1 糖原含量測定說明書 (貨號:WS1650W 微板法 96 樣) 一、產品簡介: 糖原是由葡萄糖分子通過糖苷鍵聚合而成的高分子物質,作為重要的能源物質儲存于肝 臟、肌肉和腦等重要器官。糖原的儲存或代謝異常可引起多種疾病,因此測定糖原含量的 變化,對研究糖原代謝及相關疾病有著重要的意義。 采用蒽酮法:即利用強堿性提取液提取糖原,濃硫酸是糖原脫水生產糖醛衍生物,糖醛 類與蒽酮作用,在 620nm 處有吸收峰,再與相同方法處理的葡萄糖標準液比色定量。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×2 4℃保存 用前每瓶甩幾下使粉劑落入底部,再加 10mL 濃硫酸,充分溶解混勻后使用;用 不完的試劑 4℃保存 4-5 天。 標準品 粉劑 mg×1 4℃保存 從標準管中稱量取出 2mg 至一新 EP 中,再加 2mL 葡萄糖標準品溶液, 蒸餾水溶解即 再稀釋 1mg/mL 50 0.02mg/mL 標準品備用。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。 四、糖原含量檢測: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、檢測液制備: 按照肝臟/肌肉樣本質量(g):提取液體積(mL)13 的比例加入提取液(如取 0.1g 組織,加 0.3mL 提取液),蓋緊管蓋(用封口膜封口)95℃水解 20min,室溫冷卻 后即為糖原水解液。 ①肝糖原檢測液:在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體積約 1mL8000rpm 室溫離心 5min,取上清液 100μL 至新 EP 管中,再加 900μL 蒸餾水即上清 液稀釋 10 倍后作為檢測液測定。 ②肌糖原檢測液:在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體積約 1mL8000rpm 室溫離心 5min,取上清液 200μL 至新 EP 管中,再加 200μL 蒸餾水即上清 液稀釋 2 倍后作為檢測液測定。 ③糖原含量低的組織樣本:在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體 積約 1mL8000rpm 室溫離心 5min,取上清液作為檢測液測定。 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 620nm,所有試劑解凍至室溫(25℃)。 ② 在 EP 管中依次加入:本試劑盒僅供科研使用 2 【注】若 A 測定管值在零附近,可以增加測定管上樣量 V 檢測液(如增至 40μL),蒸 餾水相應減少,則改變后的 V 檢測液代入計算公式計算。 五、結果計算: 糖原含量(mg/g)=(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×(C 標準×V )÷(V 檢測液÷V×W)÷1.11×D =0.0018×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(V 檢測液÷V×W)×D V ---0.1mLV 檢測液---0.01mLW--取樣量,gV---提取液總體積,1mLC 標準---標準品濃度,0.02mg/mLD---樣本測試前稀釋倍數,肝糖原 D 值為 10,肌糖原 D 值為 21.11---是此法測得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數。 試劑名稱 μL空白管 (只做一次) 標準管 (只做一次) 測定管 蒸餾水 100 90 標準液 100 檢測液 10 試劑一 200 200 200 混勻,置 95℃水浴 5min(蓋緊,防止水分散失),冷卻, 200μL 轉移至 96 孔板中,于 620nm 讀取吸光值 A

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