Super Fluor 750

Super Fluor 750

Super Fluor 750

計算標記比例F/P值：

對于IgG 等大多數(shù)抗體來說，摩爾吸光系數(shù)為203000，F(xiàn)/P值在4～9 之間是合適。

1. Super Flour 488標記蛋白F/P值計算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和494nm的光吸收；

2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A494×0.11))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計算標記比例： 每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A494×稀釋倍數(shù)/(71000×蛋白摩爾濃度)

2. Super Flour 555標記蛋白F/P值計算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和555nm的光吸收；

2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A555×0.08))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計算標記比例： 每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A555×稀釋倍數(shù)/(150000×蛋白摩爾濃度)

3. Super Flour 647標記蛋白F/P值計算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和650nm的光吸收；

2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A650×0.03))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計算標記比例： 每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A650×稀釋倍數(shù)/(239000×蛋白摩爾濃度)

4. Super Flour 680標記蛋白F/P值計算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和680nm的光吸收；

2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A650×0.05))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計算標記比例： 每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A650×稀釋倍數(shù)/(184000×蛋白摩爾濃度)

5. Super Flour 750標記蛋白F/P值計算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和750nm的光吸收；

2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A750×0.04))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計算標記比例： 每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A750×稀釋倍數(shù)/(240000×蛋白摩爾濃度)