淀粉磷酸化酶試劑盒,微板法

淀粉磷酸化酶試劑盒,微板法

淀粉磷酸化酶試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉磷酸化酶活性測定說明書 （貨號：WS0750W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 淀粉磷酸化酶是植物組織中降解淀粉的關鍵酶之一, 采用無機磷比色法測定淀粉 磷酸化酶活性。 二、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 三、試劑盒的組成和配制： 【注】：全程操作需無磷環境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，避 免磷污染。 四、淀粉磷酸化酶活性檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 700nm，所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ② 在 EP 管中依次加入： ③ 顯色反應： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 提取液 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩下使粉體落入底部，再 加 6mL 提取液后于 80℃水浴溶解 試劑二 粉體 mg ×1 瓶 -20℃保存 臨用前甩下使粉體落入底部，再 加 6mL 蒸餾水溶解 試劑三 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 A:粉體 mg×1 瓶 B:液體 2mL×1 瓶 4℃保存 臨用前加 1.8mL 的 B 液，再加 23.2mL 的蒸餾水，混勻溶解備用。 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 試劑一 50 50 樣本 50 試劑二 50 50 混勻，37℃孵育 20min 試劑三 50 50 樣本 50 混勻，12000rpm，4℃離心 5min，上清液待測 上清液 50 50 試劑四 200 200本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.6402x - 0.0034，x 是標準品摩爾質量（μmol/mL）, y 是△A。 2、按蛋白濃度計算： 定義：每小時每毫克組織蛋白分解 ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。 酶活力(μmol/h/mg prot)= [(△A+0.0034)÷0.6402×V2] ÷（V1×Cpr）÷T =18.74×(△A+0.0034)÷Cpr 3、按樣本鮮重計算： 定義：每小時每克組織分解 ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。 酶活力(μmol/h/g 鮮重)=[(△A+0.0034)÷0.6402×V2] ÷(W× V1÷V)÷T =18.74×(△A+0.0034)÷W V---加入提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.05mL ； V2---酶促反應總體積，0.2mL； T---反應時間，1/3 小時； W---樣本鮮重，g； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5μmol/mL）：標準品用 10mL 試劑一溶解。（母液需在兩天內用）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根據實際樣本來調整 標準品濃度。 3 依據顯色反應階段測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。 混勻，室溫靜置 3min，700nm 下讀取各管吸光值， △A=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照）。