土壤幾丁質酶試劑盒

土壤幾丁質酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 土壤幾丁質酶試劑盒說明書 （貨號：WS5330F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 多種微生物、動物、植物等都可產生幾丁質酶，土壤中幾丁質酶主要水解幾丁質多 聚體產生 N-乙酰氨基葡萄糖，該產物進一步與鐵氰 hua鉀反應，于 420nm 處檢測，進 而計算得到土壤幾丁質酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 18mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 1.5mL 鹽酸充分混勻溶解 后，再加 1.7mL 蒸餾水混勻備用。 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 1.2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑四 液體 19mL×1 支 4℃保存 試劑五 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 試劑六 粉體 g×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 30mL 蒸餾水溶解備用。 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、水浴鍋、低溫離心機、鹽酸、 蒸餾水。 四、土壤幾丁質酶活性測定： 1、樣本制備： 取新鮮土樣或 37℃烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網備用。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 420nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1g 0.1g 試劑一 300 400 試劑二 100 混勻，37℃（恒溫培養箱）孵育 3h，4000rpm 離心 5min，取上清。 ③ 在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 試劑三 10 10 試劑四 370 370 混勻，37℃孵育 1h。 試劑五 120 120 混勻，4000rpm 離心 5min，取上清液待測。 ④ 在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 上清液 360 360 試劑六 480 480 混勻，95-100℃煮沸 10min，若有沉淀，于 12000rpm 室溫離心 5min， 取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 處讀取各管吸光值 A，ΔA＝A 對照-A 測定（每個樣本做一個自身對照）。 【注】若ΔA 較小，可以加大樣本量（如增至 0.2g），或延長 37℃的孵育時間（由 3h 增加 至 5h 或更長），則改變后的樣本重量 W 和反應時間 T 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、 標準曲線方程：y = 0.0248x + 0.0024，X 是標準品質量（μg），y 是ΔA。 2、按照樣本重量計算: 酶活定義：每克土壤每小時分解幾丁質產生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個單位。 土壤幾丁質酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0024)÷0.0248×3.89]÷W÷T =52.3×(ΔA-0.0024)÷W T---反應時間，3h； W---樣本質量，g； 3.89---體積系數； 標準品分子量---221.21； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：標準品臨用前加 2mL 蒸餾水，即為 1mg/mL。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根據 實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據第④步驟的加樣體系：360μL 標準品+480μL 試劑六，混勻，95-100℃煮沸 10min， 取全部液體至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 處讀取各管吸光值 A，標準品的質量作 為橫坐標，0 mg/mL 對應的 A 值減去各濃度標準品對應的 A 之差作為縱坐標，即可 得出標準曲線。