土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒,微板法

土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒,微板法

土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒說明 （貨號(hào)：WS5330W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 多種微生物、動(dòng)物、植物等都可產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶，土壤中幾丁質(zhì)酶主要水解幾丁質(zhì)多 聚體產(chǎn)生 N-乙酰氨基葡萄糖，該產(chǎn)物進(jìn)一步與鐵氰hua鉀反應(yīng)，于 420nm 處檢測(cè)，進(jìn) 而計(jì)算得到土壤幾丁質(zhì)酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 3mL 鹽酸充分混勻溶解后， 再加 3mL 蒸餾水混勻備用。 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 1.2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑四 液體 2mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑六 粉體 g×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部， 再加 24mL 蒸餾水溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、鹽酸、蒸餾水。 四、土壤幾丁質(zhì)酶活性測(cè)定： 1、樣本制備： 取新鮮土樣或 37℃烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ①酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣（g） 0.1g 0.1g 試劑一 200 300 試劑二 100 混勻，37℃（恒溫培養(yǎng)箱）孵育 3h，4000rpm 離心 5min，取上清。 ③ 在 EP 管中依次加入： 上清液 150 150 試劑三 10 10 試劑四 15 15 混勻，37℃孵育 0.5h。 試劑五 50 50 混勻，4000rpm 離心 5min，取上清液待測(cè)。 ④在 EP 管中依次加入： 上清液 150 150本試劑盒僅供科研使用 2 試劑六 200 200 混勻，95-100℃煮沸 10min，若有沉淀，于 12000rpm 室溫離心 5min， 取 200µL 上清液至 96 孔板中于 420nm 處讀取各管吸光值 A， ΔA＝A 對(duì)照-A 測(cè)定（每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】若ΔA 較小，可以加大樣本量（如增至 0.2g），或延長(zhǎng) 37℃的孵育時(shí)間（由 3h 增加 至 5h 或更長(zhǎng)），則改變后的樣本重量 W 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0417x + 0.0005，x 是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（μg），y 是ΔA。 2、按照樣本重量計(jì)算: 酶活定義：每克土壤每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)單位。 土壤幾丁質(zhì)酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0005)÷0.0417×3]÷W÷T=24×(ΔA-0.0005)÷W T---反應(yīng)時(shí)間，3h； W---樣本質(zhì)量，g； 3---體積系數(shù)； 標(biāo)準(zhǔn)品分子量---221.21； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 2mL 蒸餾水，即為 1mg/mL。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根據(jù) 實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)第④步驟的加樣體系：150μL 標(biāo)準(zhǔn)品+200μL 試劑六，混勻，95-100℃煮沸 10min， 取 200µL 至 96 孔板中于 420nm 處讀取各管吸光值 A，標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量作為橫坐標(biāo)，0 mg/mL 對(duì)應(yīng)的 A 值減去各濃度標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的 A 之差作為縱坐標(biāo)，即可得出標(biāo)準(zhǔn)曲 線。