土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶（SαAfa）試劑盒

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶（SαAfa）試劑盒

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶（SαAfa）試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa）活性測定試劑盒說明書 (貨號:WS5430F 分光法 24 樣) 一、產品簡介： 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa，EC 3.2.1.55）是一種能夠水解非還原呋喃阿拉 伯糖殘基的糖苷酶類。 本試劑盒提供一種簡單，靈敏，快速的測定方法，S-α-Afa分解對-硝基苯阿拉伯呋喃 糖苷生成對-硝基*酚（PNP），后者在405nm有吸收峰，通過測定吸光值升高速率即 可得出α-Afa酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部，再 加 15mL 試劑一，充分溶解備用。 試劑三 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、恒溫培養箱、分析天平、 可調式移液器、蒸餾水。 四、土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或者 37 度烘箱風干（需先粗研磨），過 40 目篩網，備用。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30 min，調節波長到 405 nm，蒸餾水調零。 ② 在離心管中依次加入下列試劑： 【注】：1. 若 A 測定超過 1.8，可對最后一步的待檢測上清液(測定管和對照管)同時進行稀釋（用水稀釋即 可），稀釋倍數 D 代入計算公式； 2.若ΔA 過小，可以增加土樣量或延長保溫時間（如：2h 或更長），重新調整的樣本量 W 和反應 時間 T 需代入計算公式重新計算。 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤（g） 0.1g 0.1g 試劑一 500 試劑二 500 迅速混勻，37℃保溫 1h（間隔 15min 振蕩混勻一次） 試劑三 300 300 混勻，12000rpm，離心 5min，取出全部上清液至 1mL 玻 璃比色皿（光徑 1cm）中，立即于 405nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測定- A 對照（每個樣本需做一個自身對照）。本試劑盒僅供科研使用 2 3. 若同時檢測同一背景下的土壤樣本，此批土壤樣本可做一個樣本自身對照，節省時間；若是不 同背景下的土壤樣本（如黑土，紅土，黃土等），則每個樣本需做一個自身對照，即按照說 明書加樣表操作即可， 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.1283x + 0.001；x 是標準品 PNP 質量（μg）， y 是△A。 2、活性定義：在 37℃，每小時每克土壤產生 1μg 對-硝基*酚（PNP）定義為 1 個酶活單位。 S-α-Afa(μg/h/g 土樣)=[(△A-0.001)÷0.1283]÷W÷T×D=7.8×(△A-0.001)÷W×D W---土壤樣品質量，g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； T---催化反應時間，1 h； PNP 相對分子質量---139.11。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水溶解，若有結晶 析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 標準品+490μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，全部上清 液轉移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，立即于 405nm 下讀取吸光值 A。 4 根據結果制作標準曲線。