土壤木質素過氧化物酶(S-Lip)試劑盒

土壤木質素過氧化物酶(S-Lip)試劑盒

土壤木質素過氧化物酶(S-Lip)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 土壤木質素過氧化物酶（Soil lignin peroxidase，S-Lip）試劑盒說明書 （貨號：WS1330F 紫外分光法 24 樣） 一、產品簡介： 木質素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，屬于木質素降解 酶系，在木質素生物降解、造紙工業、紡織工業、芳香化合物轉化與降解及環境污染控制 等方面具有較大的應用潛力。 土壤木質素過氧化物酶（S-LiP）氧化藜蘆醇生成藜蘆醛，藜蘆醛在 310nm 處有特征吸 收峰。通過測定 310nm 處的藜蘆醛的增加速率，即可得到 S-LiP 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體μL×1 瓶 4℃保存 臨用前用前甩幾下使液體落入底部， 再加 8.73mL 蒸餾水混勻備用。 試劑三 液體μL×1 支 4℃保存 臨用前用前甩幾下使液體落入底部， 取 2 個新的 EP 管，每管取 3.3μL 液 體，再加 2mL 蒸餾水混勻備用。 三、所需的儀器和用品： 紫外分光光度計、1mL 石英比色皿（光徑 1cm）、天平、低溫離心機、天平、空氣浴 /恒溫震蕩培養箱、甲苯。 四、土壤木質素過氧化物酶（S-Lip)活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣 本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩，再次研磨過 60 目篩網， 備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過粗細兩次篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： 1 紫外分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 310nm，蒸餾水調零。 2 所有試劑至常溫（25℃）狀態。 3 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 甲苯 30 30 25℃靜置 15min 試劑一 570 蒸餾水 570 試劑二 120 120 試劑三 80 80 30℃震蕩（空氣浴）反應 3h，12000rpm，4℃離心 10min，取全 部上清液移至 1mL 石英比色皿中，于 310nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定- A 對照（每個樣本做一個自身對照）。 【注】若△A 值較低，可加大土壤樣本量 W 或者延長反應時間 T，則改變后的本試劑盒僅供科研使用 2 樣本質量 W 和反應時間 T 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 酶活性定義：每克土壤每天氧化 1nmol 藜蘆醇生成藜蘆醛所需的酶量為一個酶活力單位。 S-LiP 活性（nmol/d /g 土樣）= (△A÷ε÷d) ×109× V÷W÷T= 688.2×△A÷W ε---藜蘆醛摩爾消光系數：9300L/mol/cm； d---比色皿光徑，1cm； V---反應總體積，0.8mL=0.8×10-3L； W---樣本質量，g； T---反應時間，3h=1/8d。