土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤亮an酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S-LAP） 試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS9230F48 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 土壤亮*酸氨基肽酶（LAP，EC 3.4.11.1）是一類能水解肽鏈 N-末端為亮*酸的酶， 由土壤微生物分泌。該酶活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。 土壤亮an酸氨基肽酶（S-LAP）分解 L-亮氨酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺，該物質(zhì)在 405nm 有吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算 S-LAP 活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 支 -20℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底部， 每支加 1.5mL 乙醇混勻溶解。 試劑三 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴 鍋、可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤亮*酸氨基肽酶（S-LAP）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 450 500 450 試劑二 50 50 充分混勻，37℃培養(yǎng) 1 小時(shí)（振蕩培養(yǎng)或間隔 20min 手動(dòng)振蕩混勻 幾下） 試劑三 300 300 300 混勻，8000rpm 離心 5min（若上清液不澄清可加大離心力），取全部 上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，405nm 下讀取吸光值 A， △A=A 測(cè)定- A 對(duì)照-A 空白（每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長(zhǎng) 37℃的孵育時(shí)間 T（如增至 4 小時(shí)或更長(zhǎng)），或增加土樣質(zhì) 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若測(cè)定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時(shí)間 T（如減至 0.5 小時(shí)或更短）。 則改變后 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。或?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測(cè)上清液（包括測(cè)定管、對(duì)照管本試劑盒僅供科研使用 2 和空白管）同時(shí)用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0116x + 0.0036；x 為標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量（nmol），y 為△A。 2、單位定義：每小時(shí)每克土樣生成 1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。 S-LAP(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.0036) ÷0.0116÷W÷T×D =86.2×(ΔA-0.0036)÷W×D T---反應(yīng)時(shí)間，1h； W---土壤樣本實(shí)際取樣量，g。 D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）：臨用前甩幾下或離心，使粉體落入底部，加入 0.5mL 乙醇，渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻，得到 10μmol/mL 備用。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度：0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來 調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管依次加入：50μL 標(biāo)準(zhǔn)品+450μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，取全部液體 至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 405nm 下讀取吸光值，根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn) 曲線。