土壤半纖維素酶/土壤木聚糖酶試劑盒

土壤半纖維素酶/土壤木聚糖酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤半纖維素酶/土壤木聚糖酶試劑盒說明書 （貨號：WS6230F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 半纖維素酶主要檢測木聚糖酶活力，是將木聚糖降解成低聚糖和木糖的一組酶的總 稱，廣泛應用于釀造和飼料工業中。 土壤半纖維素酶在酸性環境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進一步在沸水浴 條件下與 3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應，在 540nm 處有特征吸收峰，反應液顏色的 深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率，即可 計算該酶活力大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液器、天平、常溫離心機、 空氣浴（恒溫震蕩儀）、水浴鍋。 四、土壤半纖維素酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min，調節波長至 540nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.3 0.3 試劑一 600 900 試劑二 300 充分混勻，40℃培養 6 小時（振蕩培養或間隔一段時間手動振蕩 混勻幾下），12000rpm，25℃離心 10min，上清液待用 ③ 顯色反應，在 EP 管中依次加入： 上清液 40 40 試劑三 200 200 混勻，沸水浴（95-100℃，可用封口膜纏緊，防止水分流失） 5min 后，冷卻至室溫， 蒸餾水 800 800 混勻，取 800μL 液體至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 540nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定管-A 空白管。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長 40℃的孵育時間 T（如 24 小時或更長），或增加土樣質本試劑盒僅供科研使用 2 量 W，或增加③歩顯色反應步驟中的上清液 V1（如由 40μL 增至 240μL 或更大， 則蒸餾水相應減少）。則改變后的 T 和 W 和 V1 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1，③歩顯色反應步驟中的上清液可用蒸餾水稀釋， 則稀釋倍數 D 代入公式計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y=11.114x-0.0008，x 是標準品質量（mg），y 是△A。 2、酶活定義：PH4.8 條件下，每克土壤每天分解木聚糖產生 1mg 還原糖所需的酶量為 一個酶活單位。 土壤半纖維素酶活力(mg/d/g 土樣)=[(△A+0.0008)÷11.114]×(V2÷V1)÷W÷T×D =8.1×(△A+0.0008)÷W×D V1---顯色反應中上清液體積，40μL=0.04mL； V2---反應總體積，900μL=0.9mL； T---反應時間，1/4d； W---土壤樣本質量，g。 D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水（母液需在兩天 內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.6, 1.2, 1.8, 2.4, 3. mg/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在顯色反應階段，按照測定管加樣表操作，依據結果即可制作標準曲線。