土壤漆酶(S-Lac)活性檢測試劑盒,微板法

土壤漆酶(S-Lac)活性檢測試劑盒,微板法

土壤漆酶(S-Lac)活性檢測試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤漆酶（Soil Laccase，SL）試劑盒說明書 （貨號:WS5230W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 土壤漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，具有較強的 氧化還原能力。土壤漆酶分解底物 ABTS 產生 ABTS 自由基，在 420nm 處的吸光系數遠 大于底物 ABTS，測定 ABTS 自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使粉劑落到底部， 再加 6mL 蒸餾水充分溶解，4℃ 保存一周，若變色則不能使用。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、天平、低溫離心機、振蕩培養箱。 四、土壤漆酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩備用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min，調節波長到 420nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本（g） 0.02 0.02 試劑一 200 300 試劑二 100 37℃振蕩反應 10min，12000rpm，4℃離心 5min，分別取 上清 200μL 轉移至 96 孔板中，于 420nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照）。 【注】若△A 差值較小，可增加樣本量或延長反應時間 T，則改變后的樣本質量 W 和反應時間 T 則代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 酶活定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位（U）。 SL 活性(nmol/min /g 土樣)=[△A÷(ε×d)×V×109]÷W÷T=1.67×△A÷W ε---ABTS 摩爾消光系數：36×103L/mol/cm； d---比色皿光徑，0.5cm； V---反應總體積，0.3mL=3×10-4L； W---樣本質量，g； T---反應時間，10min