蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS7140W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物；經(jīng)光譜掃描，該藍(lán) 色復(fù)合物在 600nm 處有吸收峰，在一定的蛋白濃度范圍（1-1000μg/mL）內(nèi)，其顏 色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。 二、測(cè)試盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1mL×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽和蒸餾水。 四、蛋白含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 1 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽 水）冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測(cè)液。 【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如 10 倍。實(shí) 驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 2 細(xì)菌或細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取 液；超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如 10 倍。實(shí) 驗(yàn)前可以先選 2 個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 3 液體樣本：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測(cè)定，如 10 倍。實(shí)驗(yàn)前 可以先選 2 個(gè)樣本測(cè)定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，設(shè)定波長(zhǎng)為 600nm。 ② 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 空白管(只做一次) 待測(cè)液 40 蒸餾水 40 試劑一 200 200 混勻，,置于室溫（25℃）靜置 10min，600nm 處測(cè)定吸光值 A （5~15min 完成比色），△A= A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】：1.確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋，即使 A 測(cè)定的值低于 1.2；稀 釋倍數(shù) D 帶入公式計(jì)算。 2.去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和 0.1mol/L 的 NaOH 溶液對(duì)該實(shí)驗(yàn)會(huì)有影響。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.8457x + 0.0136；x 是標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 是△A。 2、蛋白含量 (mg/g 鮮重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.26×(△A-0.0136)×D÷W 3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.04mL； W---樣本質(zhì)量：g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（0.5mg/mL）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測(cè)定管加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。