蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法)

蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法)

蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法)

本試劑盒僅供科研使用 1 考馬斯亮藍法測蛋白含量試劑盒說明書 （貨號：WS7140F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；經光譜掃描，該 藍色復合物在 600nm 處有吸收峰，在一定的蛋白濃度范圍（1-1000μg/mL）內，其 顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。 二、測試盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、離心機、可調式移液器、研缽。 四、蛋白含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 1 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽 水）冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定，如 10 倍。實 驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 2 細菌或細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取 液；超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：依據研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定，如 10 倍。實 驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 3 液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 【注】：依據研究經驗，一般需將樣本稀釋到適當倍數再進行測定，如 10 倍。實驗前可 以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 2、上機檢測： ① 分光光度計預熱 30 min 以上，設定波長為 600nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管(只做一次) 待測液 160 蒸餾水 160 試劑一 800 800 混勻，置于室溫（25℃）靜置 10min，全部液體轉移至 1mL 玻璃比色皿中，600nm 處測定吸光值 A（5~15min 完成比色）， △A=A 測定管-A 空白管。 【注】：1.確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋，即使 A 測定的值低于 1.5；稀 釋倍數 D 帶入公式計算。 2.去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和 0.1mol/L 的 NaOH 溶液對該實驗會有影響。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 5.8086x + 0.0322；x 是標準品濃度（mg/mL），y 是△A。 2、蛋白含量(mg/g 鮮重)=[(△A-0.0322)÷5.8086×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.172×(△A-0.0322)×D÷W 3、蛋白含量(mg/mL)=[ (△A-0.0322)÷5.8086×V1]÷V1×D=0.172×(△A-0.0322)×D V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.16mL； W---樣本質量：g； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（0.5mg/mL）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。 也可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。