蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法),微板法

蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒說明書 (貨號：WS2340W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 在堿性溶液中，凡分子中含二個或二個以上酰胺基(—CO-NH2)或與此相似基團的化合 物均與二價銅離子作用，絡合物呈紫色，這一反應稱雙縮脲反應。蛋白質分子含有眾多肽 鍵(—CONH—)，可發生雙縮脲反應，且呈色強度在一定濃度范圍內與蛋白質含量成正比， 經光譜掃描 540nm 為吸波長。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑 A 液體 9mL×1 瓶 4℃避光保存 依據實驗用量，臨用前試劑 A:B:超純水=5:3:2 的比例混勻 成反應 mix，4℃避光保存兩周。 試劑 B 液體 5.5mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫水浴鍋（恒溫培養箱）、移液器和蒸餾水。 四、蛋白含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清， 即待測液。 ② 細菌或細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 ③ 液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測 ① 酶標儀預熱 30min，調節波長到 540 nm，蒸餾水調零。 ② 可先取 2 個樣本預測，確定適合本批樣本的濃度，若需要可用蒸餾水進行稀釋，稀釋 倍數 D 代入公式計算。 ③ 在 2mL 的 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 標準管 （只做一次） 空白管 （只做一次） 樣本 20 標準品 20 蒸餾水 20 反應 mix 180 180 180 混勻，于 37℃保溫 10min，全部轉移到 96 孔板， 于 540nm 處測定吸光值 A，△A= A 測定-A 空白。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、蛋白含量(mg/g 鮮重)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =10×△A÷(A 標準-A 空白)÷W×D 2、蛋白含量 (mg/mL)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V)×D =10×△A÷(A 標準-A 空白)×D 3、蛋白含量(μg/104 cell))=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×500)×D =0.02×△A÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---蛋白標準品濃度，10mg/mL； V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.02mL； W---樣本質量：g； D---稀釋倍數； 500--細菌或細胞總數，500 萬。 注意事項： 1 本法可測定范圍為 1-10mg 蛋白質，適用于精度不高的蛋白質含量測定。 2 硫酸銨、Tris 緩沖液、EDTA、PVP 和一些氨基酸等物質會對測定造成干擾。 3 工作液長期放置后若有暗紅色沉淀出現，即不能使用。