蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法)

蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法)

蛋白含量(SP)試劑盒(雙縮脲法)

本試劑盒僅供科研使用 1 雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào)：WS2340F 分光法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 在堿性溶液中，凡分子中含二個(gè)或二個(gè)以上酰胺基(—CO-NH2)或與此相似基團(tuán)的化合 物均與二價(jià)銅離子作用，絡(luò)合物呈紫色，這一反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子含有眾多肽 鍵(—CONH—)，可發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，且呈色強(qiáng)度在一定濃度范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比， 經(jīng)光譜掃描 540nm 為吸波長(zhǎng)。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 試劑 A 液體 45mL×1 瓶 4℃避光保存 依據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，臨用前試劑 A:B:超純水=5:3:2 的比例混勻成 反應(yīng) mix，4℃避光保存兩周。 試劑 B 液體 27mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、移液器。 四、蛋白含量測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清， 即待測(cè)液。 ② 細(xì)菌或細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測(cè)液。 ③ 液體樣本：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè) ① 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 可先取 2 個(gè)樣本預(yù)測(cè)，確定適合本批樣本的濃度，若需要可用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋 倍數(shù) D 代入公式計(jì)算。 ③ 在 2mL 的 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 （只做一次） 空白管 （只做一次） 樣本 100 標(biāo)準(zhǔn)品 100 蒸餾水 100 反應(yīng) mix 900 900 900 混勻，于 37℃保溫 10min，全部轉(zhuǎn)移到 1mL 玻璃比色皿中， 于 540nm 處測(cè)定吸光值 A，△A= A 測(cè)定-A 空白。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、蛋白含量(mg/g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =10×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 2、蛋白含量(mg/mL)=C 標(biāo)準(zhǔn)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D =10×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 3、蛋白含量(μg/104 cell))=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×500)×D =0.02×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度，10mg/mL； V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.1mL； W---樣本質(zhì)量：g； D---稀釋倍數(shù)； 500--細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。 注意事項(xiàng)： 1 本法可測(cè)定范圍為 1-10mg 蛋白質(zhì)，適用于精度不高的蛋白質(zhì)含量測(cè)定。 2 硫酸銨、Tris 緩沖液、EDTA、PVP 和一些氨基酸等物質(zhì)會(huì)對(duì)測(cè)定造成干擾。 3 工作液長(zhǎng)期放置后若有暗紅色沉淀出現(xiàn)，即不能使用。