氨基酸(AA)含量試劑盒,微板法

氨基酸(AA)含量試劑盒,微板法

氨基酸(AA)含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒說明書 （貨號：WS5140W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 氨基酸是組成蛋白質的基本單位，也是蛋白質分解產物的種類之一。游離氨基酸與果蔬 品質，采后生理，氮素代謝等有密切的關系。也能反映動物肝臟、腎臟的生理狀態。 本試劑盒采用茚三酮顯色法測定氨基酸：在酸性條件下，氨基酸與茚三酮共熱能產生藍 紫色化合物二酮茚胺，經光譜掃描在 570 nm 有特征吸收峰；通過測定 570 nm 吸光度，來 計算氨基酸含量。 二、測試盒組成和配制： [注]：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液槍、研缽、無水乙醇、冰和蒸餾水。 四、氨基酸(AA)含量的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.2g 組織），加入 1mL 提取液，進行室溫勻漿， 12000rpm，4℃離心 10min，上清液置冰上待測。 [注]:也可按照組織質量（g）提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌或細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液， 進行室溫勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，上清液置冰上待測。 [注]:也可按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液體樣本：直接檢測。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 570 nm。 ② 在 EP 管中按照下表依次加入試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（只做一次） 蒸餾水 40 上清液 40 反應 mix 560 560 試劑三 40 40 混勻，蓋緊蓋（可用封口膜纏繞，防止水分散失）， 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×4 瓶 4℃保存 臨用前每瓶加入 1.5mL 無水乙醇，蓋 緊后充分混勻，再加入 13.5mL 試劑 一混勻制備成反應 mix,10 天內用完。 試劑三 粉劑×1 支 4℃保存 臨用前加 4.5mL 蒸餾水,充分溶解 標準品 液體×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑本試劑盒僅供科研使用 2 置沸水浴中 15 min，取出后冷卻至室溫并搖晃混勻約 1min。 95%乙醇 320 320 混勻，取 200μL 澄清液體（若渾濁可 8000rpm 室溫離心 5min） 于 96 孔板中，在 570nm 讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 空白。 【注】若 A 測定值大于 1.5，可用蒸餾水把上清液稀釋后再按照加樣表重新測定， 則稀釋倍數 D 代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.3963x + 0.006；x 是標準品摩爾濃度(μmol/mL)，y 是ΔA。 2、按樣本質量計算： 氨基酸含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷(V1÷V×W)×D =2.52×(ΔA-0.006)÷W×D 3、按細胞數量計算： 氨基酸含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷(V1÷V×細胞數量)×D =2.52×(ΔA-0.006)÷細胞數量×D 4、按照液體體積計算： 氨基酸含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷V1×D=2.52×(ΔA-0.006)×D V---樣品提取液總體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.04 mL； W---樣品質量，g。 D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（10μmol/mL）； 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可 根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管的加樣表操作，根據結果即可制作標準曲線。