氨基酸(AA)含量試劑盒

氨基酸(AA)含量試劑盒

氨基酸(AA)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒說明書 （貨號：WS5140F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位，也是蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物的種類之一。游離氨基酸與果蔬 品質(zhì)，采后生理，氮素代謝等有密切的關(guān)系。也能反映動(dòng)物肝臟、腎臟的生理狀態(tài)。 本試劑盒采用茚三酮顯色法測定氨基酸：在酸性條件下，氨基酸與茚三酮共熱能產(chǎn)生藍(lán) 紫色化合物二酮茚胺，經(jīng)光譜掃描在 570 nm 有特征吸收峰；通過測定 570 nm 吸光度，來 計(jì)算氨基酸含量。 二、測試盒組成和配制： [注]：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進(jìn)行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、 研缽、無水乙醇、冰。 四、氨基酸(AA)含量的測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.2g 組織），加入 1mL 提取液，進(jìn)行室溫勻漿， 12000rpm，4℃離心 10min，上清液置冰上待測。 [注]:也可按照組織質(zhì)量（g）提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 細(xì)菌或細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液， 進(jìn)行室溫勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，上清液置冰上待測。 [注]:也可按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取 ③ 液體樣本：直接檢測。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 570 nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中按照下表依次加入試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（只做一次） 蒸餾水 40 上清液 40 反應(yīng) mix 560 560 試劑三 40 40 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×2 瓶 4℃保存 臨用前每瓶加入 1.5mL 無水乙醇，蓋 緊后充分混勻，再加入 13.5mL 試劑 一混勻制備成反應(yīng) mix,10 天內(nèi)用完。 試劑三 粉劑×1 支 4℃保存 臨用前加 2.5mL 蒸餾水，充分溶解。 標(biāo)準(zhǔn)品 液體×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 混勻，蓋緊蓋（可用封口膜纏繞，防止水分散失）， 置沸水浴中 15 min，取出后冷卻至室溫并搖晃混勻約 1min。 95%乙醇 320 320 混勻，全部澄清液體（若渾濁可 8000rpm 室溫離心 5min） 轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，在 570nm 讀取吸 光值 A，△A=A 測定- A 空白。 【注】若 A 測定值大于 1.5，可用蒸餾水把上清液稀釋后再按照加樣表重新測定， 則稀釋倍數(shù) D 代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 16.218x - 0.0217；x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量（μmol），y 是ΔA。 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算： 氨基酸含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA+0.0217)÷16.218] ÷(V1÷V×W)×D =1.54×(ΔA+0.0217)÷W×D 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 氨基酸含量(μmol/104 cell)=[(ΔA+0.0217)÷16.218] ÷(V1÷V×細(xì)胞數(shù)量)×D =1.54×(ΔA+0.0217)÷細(xì)胞數(shù)量×D 4、按照液體體積計(jì)算： 氨基酸含量(μmol/mL)=[(ΔA+0.0217)÷16.218]÷V1×D=1.54×(ΔA+0.0217)×D V---樣品提取液總體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.04 mL； W---樣品質(zhì)量，g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）； 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可 根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。