總膽GU醇(TC)含量試劑盒

總膽GU醇(TC)含量試劑盒

總膽GU醇(TC)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 總膽*醇（total cholesterol，TC）含量試劑盒說明書 （貨號：WS9090F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 總膽*醇（TC）包括游離膽*醇和膽*醇酯。是指組織中所有脂蛋白所含膽*醇之總和。 利用酯酶催化膽*醇酯水解生成游離膽*醇（FC），FC 在膽*醇氧化酶作用下被氧 化生成 4-膽甾烯酮和 H2O2；接著與 4-氨基氨替吡啉等反應生成紅色醌類化合物，其在 510nm 處有特征吸收峰，通過檢測 510nm 處吸光值即可得出 TC 含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 標準品濃度為 5.17mmol/L 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、乙醇、可調式移液槍、水浴鍋、離 心機、研缽、蒸餾水。 四、總膽*醇（TC）含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 乙醇，進行冰浴勻漿，12000rpm，4℃ 或室溫離心 10min，取上清液待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 乙醇，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定，若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 紫外分光光度計預熱 30 min，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃），在 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 7 標準品 7 蒸餾水 7 試劑一 700 700 700 混勻，37℃孵育 10min，于 510nm 處讀取各管吸光值 A。 【注】1.若測定管的 A 值大于 1，則需將組織或細胞樣本用乙醇進行稀釋（若是液體樣本如血清需 用生理鹽水或 PBS 或蒸餾水稀釋），稀釋倍數 D 需代入公式重新計算。 2.若 A 測定管值低于空白管，可增加樣本加樣體積 V1（如增至 15μL 或更多，則試劑一保 持不變，標準品仍為 7μL，額外加 8μL 蒸餾水補齊）；或增加樣本取樣質量 W（如增至 0.2g本試劑盒僅供科研使用 2 或更多），則改變的 V1 和 W 則代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、按樣本質量計算： TC(μg/g 重量)=(C 標準×V2) ×Mr×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =1998.7×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷W×D 2、按細胞數量計算： TC(μg/104 cell)=(C 標準×V2) ×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =4×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ×D 3、液體中 TC 含量計算： TC(μg/mL)=(C 標準×V2) ×Mr×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =1998.7×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×D TC(mmol/L)=(C 標準×V2)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =5.17×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ×D C 標準---5.17mmol/L； Mr=386.6---膽*醇分子量； V1---樣本加入體積，0.007mL； V2---標準品加入體積，0.007mL； V---提取液體積，1mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 500---細胞數量，萬； W---樣本取樣質量，g。