甘油三酯(TG)含量試劑盒

甘油三酯(TG)含量試劑盒

甘油三酯(TG)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 甘油三酯（triglyceride, TG）含量試劑盒說明書 （貨號：WS0190F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 甘油三酯（TG）是三分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要 成分，也是重要呼吸底物。 甘油三酯（TG）被脂蛋白脂肪酶水解為甘油和游離脂肪酸。甘油接著被甘油激酶(GK) 的催化生成甘油-1-磷酸(G-1-P)。G-1-P 被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成過氧化氫 (H2O2)，(H2O2)與 4-氨基氨替吡啉等反應生成紅色醌類化合物，其在 510nm 處有特征吸 收峰，通過檢測 510nm 處吸光值即可得出 TG 含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再加 2.2mL 蒸餾水，充分震蕩溶解備用。 試劑二 液體 18mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉劑 mg×1 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再加 2.1mL 蒸餾水，充分震蕩溶解備用。 試劑四 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液槍、水浴鍋、離心機、 研缽、蒸餾水。 四、甘油三酯（TG）含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 提取液，在冰上進行勻漿，12000rpm， 4℃或室溫離心 10min，取上清液待測。 【注】：若組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本，需用無水乙醇進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃或室溫離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定，若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 標準品 60 樣本 60 試劑一 40 40 40 試劑二 340 340 400 試劑三 40 40 40 試劑四 220 220 220 混勻，室溫（25℃）避光孵育 20min，全部液體轉移至 1mL 玻璃 比色皿（光徑 1cm）中，于 510nm 處比色，讀取各管 A 值。 【注】1. 若測定管的 A 值大于 0.5，則需將樣本進行稀釋（用提取液稀釋）或減少樣本加樣量 V1（如 減至 40μL，則試劑二相應增加），稀釋倍數 D 或樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 2. 若樣本為血清，蛋黃（需用乙醇提取）等高 TG 樣本，可把樣本 V1 降為 10μL，另用 50μL 蒸餾水補齊，再按照上述加樣表操作測定，則改變后的 V1 需帶入公司計算。 3. 若樣本自身含有高的甘油背景值或者含有高的抗氧化物質（如 VC 等），需要增設一個樣本 自身對照（即 60μL+340μL 試劑二+40μL 試劑三+220μL 試劑四，避光反應 20min，510nm 讀取吸光值 A），測定管減去對照管，代入計算公式計算。 五、結果計算： 1、按樣本質量計算： TG(μg/g 重量)=(C 標準×V2) ×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =500×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷W×D 2、按細胞數量計算： TG(μg/104 cell)=(C 標準×V2) ×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ×D 3、液體中 TG 含量計算： TG(μg/mL)=(C 標準×V2)×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =500×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×D TG(mmol/L)=(C 標準×V2) ×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1÷Mr×D =0.782×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---標品濃度，0.5mg/mL=500μg/mL； Mr---甘油三酯分子量，639； V---提取液體積，1mL； V1---樣本加入體積，0.06mL； V2---標準品加入體積，0.06mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； 500---細胞數量； W---樣本取樣質量，g。