游離膽gu醇(FC)含量試劑盒

游離膽gu醇(FC)含量試劑盒

游離膽gu醇(FC)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 游離膽*醇（Free cholesterol, FC）含量試劑盒說明書 （貨號：WS1190F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 游離膽*醇（FC）不僅參與形成細胞膜，而且是合成膽汁酸，維生* D 以及甾體激素的原料。其血 清濃度可作為脂代謝的指標。 游離膽*醇（FC）在膽*醇氧化酶作用下被氧化生成 4-膽甾烯酮和 H2O2；接著與 4-氨基氨替吡啉等 反應生成紅色醌類化合物，其在 510nm 處有特征吸收峰，通過檢測 510nm 處吸光值，即可得出 FC 含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再加 2.2mL 蒸餾水，充分震蕩溶解 試劑二 液體 18mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液槍、水浴鍋、離心機、 研缽、蒸餾水。 四、游離膽*醇（FC）含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 提取液，在冰上進行勻漿，12000rpm， 4℃或室溫離心 10min，取上清液待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定，若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30 min，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 標準品 80 樣本 80 試劑一 40 40 40 試劑二 340 340 420本試劑盒僅供科研使用 2 試劑三 240 240 240 混勻，避光孵育 60min，全部液體轉移至 1mL 玻璃比色皿 中，于 510nm 處讀取各管吸光值 A。 【注】：若測定管的 A 值大于 1.5，則需將樣本進行稀釋（用提取液稀釋）或減少樣本加樣量 V1（如減至 40μL，則試劑二相應增加），稀釋倍數 D 或樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、按樣本質量計算 FC（μg/g 重量）=(C 標準×V2) ×Mr×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =193.3×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ÷W×D 2、按細胞數量計算： FC（μg/104 cell）=(C 標準×V2) ×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =0.39×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) ×D 3、液體中 FC 含量計算： FC（μg/mL）=(C 標準×V2) ×Mr×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =193.3×(A 測定-A 空白)÷(A 標準-A 空白) C 標準---0.5μmol/mL； Mr=386.6---膽*醇分子量； V1---樣本加入體積，0.08mL； V2---標準品加入體積，0.08mL； V---提取液體積，1mL； D---稀釋倍數； 500---細胞數量； W---樣本取樣質量。