查爾酮異構(gòu)酶（CHI）試劑盒,微板法

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）試劑盒,微板法

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 查爾酮異構(gòu)酶(chalcone isomerase,CHI)試劑盒說明書 （WS7001W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 查爾酮異構(gòu)酶(CHI, EC 5.5.1.6)是個被認識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶，也是黃 酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。廣泛存在于多種植物中，在植物的抗菌機制、抗脅迫、細 胞的發(fā)育和分化、色素的積累和外源基因的表達等方面起著重要的作用。 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)可使查爾酮形成二氫黃酮，通過檢測查爾酮的初始降解速率進而 得出查爾酮異構(gòu)酶的酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體×2 支 4℃保存 臨用前離心或甩幾下使試劑落入 底部，每支再分別加 0.7mL 乙醇 充分溶解，4℃保存。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、查爾酮異構(gòu)酶（CHI）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。12000rpm 4℃離心 15min，取上 清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例提取 2、上機檢測： ① 酶標儀預(yù)熱 30min 以上，溫度設(shè)定 30℃，調(diào)節(jié)波長至 380nm。 ② 試劑放在 30℃水浴 5min； ③ 按照下表在 96 孔板中依次加入試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 樣本 40 試劑一 150 試劑二 10 混勻，30℃條件下，立即于 380nm 處讀取吸光值 A1，10min 后讀取 A2。 △A=A1-A2。 【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可延長反應(yīng)時間 T（如：30min 或更長）， 或加大樣本量 V1（如增至 80μL，則試劑一相應(yīng)減少），重新 調(diào)整后的反應(yīng)時間 T 和 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、按樣本蛋白濃度計算： 酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘吸光值變化 0.01 為一個酶活單位（U）。本試劑盒僅供科研使用 2 CHI（U/min/mg prot）＝(ΔA÷0.01)÷(V1×Cpr) ÷T=250×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計算： 酶活單位定義：每克樣本每分鐘吸光值變化 0.01 為一個酶活單位（U）。 CHI（U/min/g 鮮重）＝(ΔA÷0.01)÷(W×V1÷V) ÷T=250×ΔA÷W V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.04 mL； T---反應(yīng)時間，10 min； W---樣本質(zhì)量，g。 Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測定試劑盒；