尿酸(UA)含量試劑盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量試劑盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量試劑盒(尿酸酶比色法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 尿酸含量（尿酸酶法）檢測試劑盒說明書 （貨號：WS2021W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 尿酸是嘌呤代謝的最終產物，并通過腎臟過濾排泄到尿液中。許多腎臟疾病會影響尿 酸水平，所以尿酸測定在診斷和評估腎臟疾病中具有重要作用。 本試劑盒利用尿酸酶特異作用于尿酸，氧化產生的產物與顯色劑反應呈現的（粉）紅 色，該有色物質在520nm有吸收峰，進而計算得到尿酸含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 14mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，再 加 1.1mL 的試劑一溶解備用。 標準管 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前加2mL試劑一超聲*全溶 解，即0.2mg/mL尿酸溶液，再用蒸 餾水稀釋2倍即0.1mg/mL備用。 三、所需儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、離心機、蒸餾水。 四、尿酸含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 液體樣品： 澄清的液體可直接檢測；若渾濁則離心后取上清液檢測。 ② 組織樣本： 取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部轉移到 EP 管中，12000rpm， 常溫離心 10min，上清液待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ③ 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。本試劑盒僅供科研使用 2 2、上機檢測： ①酶標儀預熱 30min，設置溫度在 37℃，設定波長到 520nm。 ②做實驗前選取 2 個樣本，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數 D。 ③所有試劑解凍至室溫，在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管 （僅做一次） 標準管 （僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 標準品 10 試劑一 100 100 100 試劑二 80 80 80 混勻，37℃避光孵育 5min，于 520nm 處讀取吸光值 A1。 試劑三 10 10 10 混勻，37℃避光反應 10min，520nm 處讀取吸光值 A2（直到 A2 值不變），ΔA =A2-A1。 【注】：1. 測定管的 A 值若超過 1，可把樣本再進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。 2. 若△A 的差值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量 V1（如增至 40μL，則試劑一相應減少， 保持總體積不變），則改變后的 V1 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、按液體體積計算： 尿酸含量(mg/mL)=(C 標準×V 標)×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)÷V1×D =0.1×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)×D 尿酸含量(μmol/L)=(C 標準×V 標)×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)÷V1×D×106÷Mr =0.1×106÷Mr×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)×D 2、按樣本鮮重計算： 尿酸含量(mg/g)=(C 標準×V 標)×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.1×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白) ÷W×D 3、按細胞數量計算： 尿酸含量(μg/104 cell)=(C 標準×V 標) ×103×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)÷(500×V1÷V)×D =0.2×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ΔA 標準-ΔA 空白)×D C 標準---尿酸標品濃度，0.1mg/mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； V 標---加入樣本體積，0.01mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； V---提取液體積，1mL； W---取樣質量，g； 500---細胞數量，萬； Mr---尿酸分子量，168.1。