肌酸(Creatine)含量試劑盒(肌酸酶法)

肌酸(Creatine)含量試劑盒(肌酸酶法)

肌酸(Creatine)含量試劑盒(肌酸酶法)

本試劑盒僅供科研使用 1 肌酸含量（酶法）檢測試劑盒說明書 （貨號:WS3021F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 肌酸是一種內源性化合物，其功能是通過肌酸激酶的磷酸化使機體維持高的ATP/ADP 比率。肌酸補充劑是一種運動性能增強劑，亦用于治療肌肉和神經退行性等疾病。因此 肌酸的檢測在研究和開發中具有廣泛的應用。 本試劑盒利用肌酸酶特異作用于肌酸生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生 成過氧化氫，過氧化氫與顯色劑反應呈現（粉）紅色，該有色物質在520nm有吸收 峰，進而計算得到肌酸含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 22mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部， 再加 1.1mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑四 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部， 再加 1.1mL 的蒸餾水溶解備用。 標準管 液體 1mL×1 支 4℃保存 臨用前用蒸餾水稀釋5倍， 即0.2mg/mL肌酸溶液 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調式移液器、離心機、蒸餾水。 四、肌酸含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、 樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部轉移到 EP 管中，12000rpm， 常溫離心 10min，上清液待測。 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣品：澄清的液體可直接檢測；若渾濁則離心后取上清液檢測。本試劑盒僅供科研使用 2 2、上機檢測： ①可見分光光度計預熱 30min，設置溫度在 37℃，設定波長到 520nm，蒸餾水調零。 ②做實驗前選取 2 個樣本，找出適合本次檢測樣本的稀釋倍數 D。 ③所有試劑解凍至室溫，在 EP 管中依次加入： 試劑名稱 （μL） 測定管 空白管 （僅做一次） 標準管 （僅做一次） 樣本 40 蒸餾水 40 標準品 40 試劑一 420 420 420 試劑二 300 300 300 試劑三 20 20 20 混勻，37℃避光孵育 10min。 試劑四 20 20 20 混勻，37℃避光反應 30min，全部液體轉移至 1mL 玻璃比色 皿中，于 520nm 處讀取吸光值 A（直到 A 值不變）， △A=A 測定-A 空白。 【注】：1. 測定管的 A 值若超過 1，可把樣本再進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。 2. 若△A 的值小于 0.005，可增加樣本加樣體積 V1（如由 40μL 增至 100μL，則試劑一相 應減少），或增加樣本取樣質量 W；則改變后的 V1 和 W 需代入公式重新計算。 2. 若樣本自身含有高的肌氨酸含量，需增設一個樣本自身對照： （即 40μL 樣本+440μL 試劑一+300μL 試劑二+20μL 試劑三），△A=A 測定-A 對照。 五、結果計算： 1、按照質量計算： 肌酸含量(μmol/g)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×W)×D×103÷Mr =1.53×△A÷(A 標準-A 空白)×D÷W 2、按細胞數量計算： 肌酸含量(nmol/104 cell)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(V1÷V×500)×D×106÷Mr =3.05×△A÷(A 標準-A 空白)×D 3、按照體積計算： 肌酸含量(μmol/L)=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷V1×D×106÷Mr =1525.2×△A÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---標品濃度，0.2mg/mL； Mr---標準品分子量，131.13； V---提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.04mL； 500---細胞數量，百萬； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。