溶jun酶(LZM)試劑盒,微板法

溶jun酶(LZM)試劑盒,微板法

溶jun酶(LZM)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 溶*酶（LYS/LZM）檢測(cè)試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS7021W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 溶*酶又叫胞壁質(zhì)酶或 N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶。能催化某些細(xì)菌細(xì)胞壁多糖的水解， 從而溶解這些細(xì)菌的細(xì)胞壁，起到殺死細(xì)菌的作用。 溶*酶可使一定濃度的渾濁菌液降解，使?jié)岫冉档停腹舛仍黾樱赏ㄟ^光度變化來測(cè) 定溶*酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃干燥保存 臨用甩幾下使粉劑落入底 部，再加 22mL 試劑一渦旋 振蕩，至全部溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 -20℃保存 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、蒸餾水。 四、溶*酶（LYS/LZM）活性檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、 樣本制備： ① 液體樣本：澄清的液體直接檢測(cè)，若渾濁則離心后取上清液檢測(cè)。 ② 組織樣本：取約 0.1g 組織，加入 1mL 生理鹽水，進(jìn)行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離 心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)定溫度 37℃，設(shè)定波長(zhǎng)到 530nm。 ② 標(biāo)準(zhǔn)品制備：臨用前甩幾下使粉劑落入底部，再加 1mL 蒸餾水充分溶解，再用蒸餾水 稀釋 100 倍（即 1：99），終濃度為 200U/mL，即 10μg/mL。 ③ 所有試劑在 37℃條件下孵育 5min，在 96 孔板中依次加入： 試劑（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管（僅做一次） 樣本 20 標(biāo)準(zhǔn)品 20 試劑二 200 200 混勻，30s 于 530nm 讀取吸光值 A1，2min30s 時(shí)再 讀取 A2，△A=A1-A2。 【注】：1.加完試劑二反應(yīng)即開始，若是批量檢測(cè)，建議加完樣本后，用排槍加試劑二，避本試劑盒僅供科研使用 2 免加樣時(shí)間造成測(cè)定誤差或者分批測(cè)定樣本。 2.若 A2 的值小于 0.2，可對(duì)樣本用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。稀釋倍數(shù) D 代入公式計(jì)算。 3.若測(cè)定管的△A 小于 0.005，可增加樣本上清液體積 V2(如增至 50μL，則標(biāo)準(zhǔn)管多加 30μL 蒸餾水，保證兩管總體積一致)，則改變后的 V2 代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照體積計(jì)算： 溶*酶含量(μg/mL)=C 標(biāo)準(zhǔn)×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×D=10×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×D 2、按樣本鮮重計(jì)算： 溶*酶含量(μg/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×D÷(W×V2÷V) =10×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W×D 3、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 溶*酶含量(μg/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×D÷(Cpr×V2÷V) =10×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr×D C 標(biāo)準(zhǔn)---標(biāo)品濃度，200U/mL，即 10μg/mL； V1---標(biāo)準(zhǔn)品加樣體積，20μL=0.02mL； V2---樣本加樣體積，20μL=0.02mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； V ---提取液，1mL； W---取樣質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的蛋白含量測(cè)定試劑盒。