糜蛋bai酶試劑盒,微板法

糜蛋bai酶試劑盒,微板法

糜蛋bai酶試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 糜*白酶/胰凝*蛋白酶（Chymotrypsin）試劑盒說明書 (貨號：WS1121W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 糜*白酶（EC 3.4.21.1）又稱胰*乳蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，具有肽鏈 內切酶的作用，通過切斷蛋白質肽鏈中*氨酸、苯丙*酸的羧端肽鏈作用，專一水解羧端芳 香族氨基酸。臨床上糜*白酶用于痰液稀化，對膿性和非膿性痰液均有效；也用于創傷或手 術后傷口愈合。 本試劑盒采用糜蛋*酶催化水解 N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙*酸對硝基酰苯 胺（SAAPFpNA）生成對硝基苯胺，后者在 405nm 有吸收峰，通過測定吸光值升高速 率即可得出糜*白酶的活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存條件 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 0.6mL×1 支 -20℃保存 若凝固則可于 37℃水浴至融化， 再加 3.8mL 蒸餾水混勻備用。 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重做標曲，則用到該試劑。 三、所需的主要儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。 四、糜蛋*酶/胰凝*蛋白酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×4000rpm 離心 5min，取上 清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 液體樣本：若是澄清液體，直接檢測，若液體樣本渾濁，需 4℃×12000rpm，離心 10min， 取上清液檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm。 ② 所有試劑解凍至室溫。在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 樣本 30 試劑一 130 試劑二 40 混勻， 立即于 405nm 處測定吸光值 A1，37℃ 條件下反應 5min 后讀取 A2，ΔA=A2-A1。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】1 .若ΔA 在零附近徘徊，可以延長反應時間 T（如延長至 10min 后讀取 A2）或增加樣本量 V1（如增 至 60μL，則試劑一相應減少），則改變后的反應時間 T 和樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 2. 若ΔA 大于 0.5，可縮短反應時間 T（如縮至 2min 后讀取 A2）或減少樣本量 V1（如減至 10μL， 則試劑一相應增加），則改變后的反應時間 T 和樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0259x - 0.001：x 為標準品(nmoL)，y 為ΔA。 2、按樣本鮮重計算： 單位定義：每克組織每分鐘催化產生 1nmoL 對硝基苯胺為一個酶活單位（U）。 糜*白酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T =257.4×(ΔA+0.001)÷W 3、按樣本蛋白濃度計算： 單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘催化產生 1nmoL 對硝基苯胺為一個酶活單位（U）。 糜*白酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(V1×Cpr)÷T =257.4×(ΔA+0.001)÷Cpr 4、按照液體體積計算： 單位定義：每毫升液體每分鐘催化產生 1nmoL 對硝基苯胺定義為一個酶活單位（U）。 糜蛋*酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷V1÷T=257.4×(ΔA+0.001) V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.03 mL； W---樣本質量，g； T---反應時間，5min； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（50μmol/mL）：臨用前甩幾下或離心，使粉體落入底部，加入 0.5mL 乙醇，渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻，得到 50μmol/mL 備用。 2 用蒸餾水把母液稀釋成以下濃度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL。也可根據實際來調 整濃度。 3 30μL 標準品+170μL 試劑一，混勻后于 405nm 處讀取 A 值，依據結果即可制作標準 曲線。