糜蛋bai酶試劑盒

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本試劑盒僅供科研使用 1 糜蛋*酶/胰凝乳*白酶（Chymotrypsin）試劑盒說明書 (貨號：WS1121F 分光法 24 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 糜*白酶（EC 3.4.21.1）又稱胰凝*蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，具有肽鏈 內(nèi)切酶的作用，通過切斷蛋白質(zhì)肽鏈中酪*酸、苯丙*酸的羧端肽鏈作用，專一水解羧端芳 香族氨基酸。臨床上糜*白酶用于痰液稀化，對膿性和非膿性痰液均有效；也用于創(chuàng)傷或手 術(shù)后傷口愈合。 糜蛋*酶可催化酪蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸與福林酚反應(yīng)后顯藍色； 其顏色的深淺與胃*白酶活性呈正比。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 提取液 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加 2.8mL 的試劑四，再加 5.6mL 的試劑二沸水加熱，渦旋 振蕩（反復(fù)幾次）直到全部溶解， 再加 24mL 的試劑二混勻，配置 完的試劑 4℃保存，三天內(nèi)用完。 試劑二 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 2mL×1 支 4℃保存 質(zhì)控品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若用該試劑，則用前加 1mL 蒸餾 水溶解，再用蒸餾水稀釋 10 倍， 即 0.1mg/mL 的糜*白酶。 三、所需的主要儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、可調(diào)式移液器、天平 四、糜*白酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×4000rpm 離心 5min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 液體樣本：液體用提取液按照 1:1 的比例混合稀釋后，4℃×4000rpm，離心 5min， 取上清液檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 680nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫。本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 100 100 試劑一 500 試劑三 100 37℃孵育 10min 試劑三 100 試劑一 500 37℃孵育 10min，4000rpm 室溫離心 10min，上清液待測 ④ 顯色反應(yīng)，在 EP 管中： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 標(biāo)準(zhǔn)管 （只做一次） 空白管 （只做一次） 上清液 200 200 標(biāo)準(zhǔn)品 200 提取液 200 蒸餾水 200 200 200 200 試劑四 100 100 100 100 試劑五 200 200 200 200 37℃孵育 20min 后（若渾濁則室溫 4000rpm 離心 5min），全部上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中，于 680nm 處讀取各管的吸光值 A。ΔA=A 測定-A 對照。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延長反應(yīng)時間 T（如 37℃孵育 10min 延長至 20min）或增加樣本 量 V1（如增至 200μL，則試劑一相應(yīng)減少），則改變后的反應(yīng)時間 T 和樣本量 V1 需代入計 算公式重新計算。 2. 若 A 測定值大于 1.5，可以減少樣本量 V1（如減至 50μL，用提取液相應(yīng)補充），則改變后 的樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、按樣本蛋白濃度計算： 酶活定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸為 1 個酶活單位(U)。 糜*白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）÷Cpr 2、按樣本鮮重計算： 酶活定義：37℃每 g 組織每分鐘催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸為 1 個酶活單位(U)。 糜蛋*酶（U/g 鮮重）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）÷W 3、液體中酶活力的計算: 酶活定義：37℃每毫升液體每分鐘催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸為 1 個酶活單位(U)。 糜蛋白*（U/mL）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷V1÷T =35×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白） V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.1mL； V2---第③歩反應(yīng)總體積，0.7mL； T---反應(yīng)時間，10min； C 標(biāo)準(zhǔn)---50μg/mL； W---樣本質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒