鈣含量檢測(cè)試劑盒,微板法

鈣含量檢測(cè)試劑盒,微板法

鈣含量檢測(cè)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 鈣含量（鄰甲*酞絡(luò)合銅比色法）檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS8121W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 鈣(Calcium)是一種金屬元素，常溫下呈銀白色晶體，動(dòng)物的骨骼、蛤殼、蛋殼都含 有碳酸鈣。檢測(cè)生命體鈣含量，主要通過(guò)檢測(cè)鈣離子濃度實(shí)現(xiàn)的。 本試劑盒利用溶液中鈣離子在堿性條件下能與鄰甲酚*絡(luò)合銅(OCPC)結(jié)合，生成紫 紅色的絡(luò)合物，加入鎂離子螯合劑，去除鎂離子背景干擾。通過(guò)檢測(cè)生成有色絡(luò)合物于 575nm 處的吸光值，即可計(jì)算出總鈣含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 11mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 11mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1mL×1 支 4℃保存 2.5mmol/L 的鈣標(biāo)準(zhǔn)品。 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、離心機(jī)、蒸餾水（無(wú)鈣離子）。 四、鈣含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、 樣本制備： ① 液體樣品：澄清的液體樣本如血清可直接檢測(cè)。 ② 組織樣本：取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 生理鹽水研磨，粗提液全部轉(zhuǎn)移到 EP 管中， 12000rpm，常溫離心 10min，上清液待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ③ 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或 細(xì)胞加入 1mL 生理鹽水，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間 隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm 離心 10min，取上清待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)定波長(zhǎng)到 575nm。 ② 所有試劑解凍至室溫，按照試劑一：試劑二為 1:1 配制反應(yīng) mix（4℃避光保存三天）。 ③ 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅測(cè)一次） 空白管 （僅測(cè)一次） 樣本 5 標(biāo)準(zhǔn)品 5 蒸餾水 5 反應(yīng) mix 200 200 200本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：1. 測(cè)定管的 A 值若超過(guò) 1，可把樣本用蒸餾水稀釋后測(cè)定，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 2. 若 A 測(cè)定值接近 A 空白值，則可以增加樣本加樣體積 V1（如增至 25μL，則反應(yīng) mix 減 為 180μL；標(biāo)準(zhǔn)管仍為 5μL，蒸餾水 20μL，反應(yīng) mix 為 180μL；空白管為蒸餾水 25μL， 反應(yīng) mix 為 180μL），則改變后的 V1 需帶入公式計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1.按液體體積計(jì)算： 鈣含量(mmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =2.5×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 2.按樣本質(zhì)量計(jì)算： 鈣含量(μmol/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =2.5×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 鈣含量(nmol/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×103×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =5×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---鈣標(biāo)品濃度，2.5mmol/L=2.5μmol/mL； V 標(biāo)---標(biāo)準(zhǔn)品加入體積，0.005mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； V1---加入樣本體積，0.005mL； V---提取液體積，1mL； W---取樣質(zhì)量，g； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)。 混勻，室溫放置 2min，于波長(zhǎng) 575nm 處讀取各管吸光度 A。