土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒,微板法

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒,微板法

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS6330W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 土壤芳基硫酸酯酶（EC 3.1.6.1）來(lái)自于土壤微生物，能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植 物可吸收的無(wú)機(jī)態(tài)硫，在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營(yíng)養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是 反映土壤質(zhì)量的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)能夠催化對(duì)-硝基苯硫酸鉀生成對(duì)-硝基*酚（PNP），后者在 410nm 有特征光吸收。通過(guò)測(cè)定 410nm 光吸收增加速率，即可計(jì)算 S-ASF 酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×2 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 每支加 1.5mL 試劑二溶解備用。 試劑二 液體 23mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液 25mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板、甲苯（自備）和蒸餾水。 四、土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本的制備： 取新鮮土樣風(fēng)干或者 37℃烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過(guò) 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過(guò)篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 410nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣（g） 0.05 0.05 甲苯 10 10 振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，室溫放置 10min 試劑一 50 試劑二 200 250 混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 試劑三 250 250 混勻，室溫靜置 2min，12000rpm 室溫離心 10min，取 200μL 上清液于 96 孔板中，于 410nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測(cè)定- A 對(duì)照（每個(gè)樣 本需做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】：1.若ΔA 過(guò)小，可以增加土樣量（如至 0.1g）或延長(zhǎng)保溫時(shí)間（如：2h 或更長(zhǎng)），重新調(diào)整 的樣本量 W 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若 A 測(cè)定超過(guò) 1.5，可取 100μL 上清液加 100μL 蒸餾水（相當(dāng)于稀釋 2 倍）于 96 孔板中 檢測(cè)，或者減少土樣量，或者降低保溫時(shí)間（如：10min），則稀釋倍數(shù) D 和重新調(diào)整的本試劑盒僅供科研使用 2 樣本量 W 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.1645x - 0.0011；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（μg），y 為吸光值ΔA。 2、單位定義：每小時(shí)每克土樣中產(chǎn)生 1μg 對(duì)-硝基*酚（PNP）定義為一個(gè)酶活力單位。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性(μg/h/g 土樣)=(ΔA+0.0011)÷0.1645÷W÷T =6.08×(ΔA+0.0011)÷W T---反應(yīng)時(shí)間，1h； W---實(shí)際稱(chēng)取干土質(zhì)量； PNP 相對(duì)分子質(zhì)量---139.11。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際 樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管加入：10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+10μL 甲苯+240μL 試劑二+250μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 410nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。