土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）試劑盒說明書 （貨號：WS6330F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 土壤芳基硫酸酯酶（EC 3.1.6.1）來自于土壤微生物，能酶促土壤有機硫化物轉化為植 物可吸收的無機態硫，在硫素的生物化學循環和植物的硫營養代謝中具有重要的作用，是反映土壤質量的一個重要生物學指標。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)能夠催化對-硝基苯硫酸鉀生成對-硝基*酚（PNP），后者在 410nm 有特征光吸收。通過測定 410nm 光吸收增加速率，即可計算 S-ASF 酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×2 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 每支加 1.5mL 試劑二溶解備用。 試劑二 液體 21mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液 23mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、 甲苯（自備）和蒸餾水。 四、土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本的制備： 取新鮮土樣風干或者 37℃烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 410nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣（g） 0.1 0.1 甲苯 18 18 振蕩混勻，使土樣全部濕潤，室溫放置 10min 試劑一 90 試劑二 360 450 混勻， 37℃振蕩反應 1h 試劑三 450 450 混勻，室溫靜置 2min，12000rpm 室溫離心 10min，取全部上清液于 1mL 玻璃比色皿中，于 410nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測定- A 對照（每 個樣本需做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 過小，可以增加土樣量（如至 0.2g）或延長保溫時間（如：2h 或更長），重新調整 的樣本量 W 和反應時間 T 需代入計算公式重新計算。 2.若 A 測定超過 1.5，可取一半上清液加等體積蒸餾水（相當于稀釋 2 倍）于 1mL 玻璃比本試劑盒僅供科研使用 2 色皿中檢測，或者減少土樣量，或者降低保溫時間（如：10min），則稀釋倍數 D 和重新 調整的樣本量 W 和反應時間 T 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.1285x - 0.002；x 為標準品質量（μg），y 為吸光值ΔA。 2、單位定義：每小時每克土樣中產生 1μg 對-硝基*酚（PNP）定義為一個酶活力單位。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性(μg/h/g 土樣)=(ΔA+0.002)÷0.1285÷W÷T =7.8×(ΔA+0.002)÷W T---反應時間，1h； W---實際稱取干土質量； PNP 相對分子質量---139.11。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在 EP 管加入：18μL 標準品+18μL 甲苯+432μL 試劑二+450μL 試劑三，混勻，取全 部上清液于 1mL 玻璃比色皿中，于 410nm 下讀取吸光值。 4 根據結果制作標準曲線。