土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法

土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法

土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤脂肪酶（S-LPS）活性試劑盒說明書 （貨號：WS8330W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 脂肪酶(EC 3.1.1.3)是一種特殊的酯鍵水解酶，能催化天然油脂水解,，在食品、醫藥、洗 滌劑和皮革等許多工業領域中都有廣泛的應用。 本試劑盒提供一種簡單、快速的檢測方法，以對硝基*酚酯作為底物，脂肪酶水解底物 產生具有顏色的對硝基*酚，在405nm波長下測定其吸光值，即可得出脂肪酶活力。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 A 液：μL×4 支 B 液：5mL×1 瓶 -20℃保存 臨用前甩幾下，使微量 A 液體落到底 部，再向每支 A 液中加入 1.2mLB 液， 混勻備用，用不完的試劑仍-20℃保存。 試劑二 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該標曲。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、可調式移液槍、冰和蒸餾水。 四、土壤脂肪酶（S-LPS）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或風干（可 37 度烘箱風干）土樣，先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 405 nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 土壤樣本（g） 0.1g 試劑一 40 40 試劑二 340 340 混勻，30℃條件振蕩反應 20min，立即于 4℃，12000rpm 離心 10min，取出 200μL 上清液至 96 孔板中，于 405nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】若ΔA 值在零附近，可以延長反應時間 T（如至 40min 或更長），或增加土壤樣本量 W（如 增至 0.2g）,則改變后的反應時間 T 和土壤樣本質量 W 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.022x - 0.0066，x 是標準品摩爾質量（nmol），y 是ΔA。本試劑盒僅供科研使用 2 2、酶活定義：每小時每克土樣釋放出 1nmol 對硝基*酚的酶量定義為一個酶活力單位。 S-LPS(nmol/h/g 干土) =[(△A+0.0066)÷0.022]÷W÷T=136.4×(△A+0.0066) ÷W T---反應時間，20 min=1/3h； W---土壤樣本實際取樣量，g。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（20μmol/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4μmol/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在 96 孔板中加入：10μL 標準品+40μL 的 B 液+330μL 試劑二，混勻，于 405nm 下 讀取吸光值，根據結果制作標準曲線。