土壤植酸酶(S-Phytase)試劑盒

土壤植酸酶(S-Phytase)試劑盒

土壤植酸酶(S-Phytase)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤植酸酶（phytase）試劑盒說明書 （貨號：WS7330F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 植酸酶（phytase，EC.3.1.3.8）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶 的總稱，屬磷酸單酯水解酶，能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效 磷，降低糞便中的磷含量，減輕對環境的污染，改善營養成分的吸收和利用，因此具有極 其廣泛的研究和應用價值。 土壤植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物，無 機磷在酸性環境中與鉬酸銨反應生成藍色復合物，通過在 700nm 處檢測該有色物質的生 成速率即可計算植酸酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 30mL 試劑一，充分溶解備 用， 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 24mL 蒸餾水，充分溶解備 用。 試劑五 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 6mL 蒸餾水，充分溶解備用。 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 反應 mix 的制備（現配現用）：試劑四：五按照 4:1 的比例混合，可根據樣本數量配制需要量， 若一次性用完，可把試劑五一次性全部倒入試劑四中，混合備用。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可 調式移液器。 四、土壤植酸酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣本情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風干或者 30℃烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 700nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤 0.2g 0.2g 試劑一 1000 試劑二 1000本試劑盒僅供科研使用 2 混勻，37℃振蕩培養 1 小時 試劑三 200 200 混勻，室溫條件下 10000rpm，離心 5min。上清液待測。 ③ 顯色反應，在 EP 管中依次加入： 上清液 300 300 試劑三 150 150 反應 mix 450 450 混勻，室溫（25℃）靜置 15min，全部液體轉移至 1mL 玻璃比色皿中，于 700nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定 -A 對照（每個測定管需設一個對照管）。 【注】1. 顯色反應階段靜置后出現渾濁現象，靜置結束后可先于室溫 10000rpm，離心 5min 后， 再取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中。 2. 若△A 值在零附近徘徊，可在 37℃孵育階段延長反應時間 T(如增至 3h 或更長)，或增加 土壤樣本量 W（如增至 0.3g），則改變后的反應時間 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.587x + 0.004，x 是標準品摩爾濃度（μmoL/mL）, y 是△A。 2、酶活定義：37℃條件下，pH5.5 的條件下，每克土樣每小時釋放出 1μmol 的無機磷為 一個酶活力單位。 土壤植酸酶活性(μmol/h/g 土樣)=(△A-0.004)÷0.587×V1÷W÷T =2.05×(△A-0.004)÷W V1---孵育階段的反應總體積，1.2mL； T---反應時間，1h； W---樣本質量，g； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5μmoL/mL）：標準品用 10mL 試劑一溶解。（母液需在兩天內用）。 2 把母液用試劑一稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.6, 1.2, 1.8, 2.4, 3. μmoL/mL。也 可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據顯色反應階段測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。