土壤核酸酶活性測定試劑盒

土壤核酸酶活性測定試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤核酸酶活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS3430F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 核酸是土壤有機磷的組分之一，在核酸酶的作用下，核酸經過多步分解最終釋放出無 機磷，水解產物是植物的磷源之一。土壤核酸酶的活性通過度量土壤核苷酸酶的活性測得。 土壤核酸酶即土壤核苷酸酶通過水解底物核糖核苷酸生成無機磷和其他物質，無機磷在 酸性環境中與鉬酸銨反應生成藍色復合物，通過在 700nm 處檢測該有色物質的生成速率 即可計算土壤核酸酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 30mL 試劑一，充分溶解備用， 試劑三 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 5mL 蒸餾水，充分溶解備用。 試劑六 粉劑 mg×3 支 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，每 支再加入 1.5mL 蒸餾水，現配現用。 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 【注】：全程操作需無磷環境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿， 避免磷污染。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋， 可調式移液器。 四、土壤核酸酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣本情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風干或者 30℃烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩，備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 700nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤樣本（g） 0.1 0.1 試劑二 500 混勻，37℃振蕩培養 2h（間隔 30min 振蕩混勻一次） 試劑三 500 500 試劑二 500 立即混勻，于 12000rpm，室溫或 4℃離心 10min，本試劑盒僅供科研使用 2 上清液需立即測定，不可久置。 ③ 顯色反應，在 EP 管中依次加入： 上清液 160 160 試劑四 400 400 試劑五 80 80 試劑六 80 80 混勻，室溫靜置 10min，全部液體轉移至 1mL 玻璃 比色皿(光徑 1cm)中，于 700nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本需做一個自身對照）。 【注】：若△A 值在零附近徘徊，可在 37℃孵育階段延長反應時間 T(如增至 3h 或更長)，或增加 土壤樣本量 W（如增至 0.2g），則改變后的反應時間 T 和 W 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 1.0031x - 0.0016，x 是標準品摩爾濃度（μmoL/mL）, y 是△A。 2、酶活定義：37℃條件下，每克土樣每小時釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。 土壤核酸酶活性(μmol/h/g 土樣)=(△A+0.0016)÷1.0031×V1÷W÷T =0.5×(△A+0.0016)÷W V1---孵育階段的反應總體積，1mL； T---反應時間，2h； W---樣本質量，g； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5μmoL/mL）：標準品用 10mL 蒸餾水溶解。（母液需在兩天內用）。 2 把母液用試劑一稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmoL/mL。也 可根據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據顯色反應階段測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。