土壤焦磷酸酶(S-PPase)試劑盒

土壤焦磷酸酶(S-PPase)試劑盒

土壤焦磷酸酶(S-PPase)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤焦磷酸酶活性測定試劑盒說明書 (貨號：WS9330F 分光法 24 樣) 一、產品簡介： 土壤焦磷酸酶（焦磷酸鹽磷酸水解酶，EC 3.6.1.1）催化焦磷酸鹽水解成正磷酸鹽。在 土壤有機磷的礦化和轉化中發揮重要作用。 本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的檢測方法。土壤焦磷酸酶催化焦磷酸鹽水解成 磷酸鹽。可通過在 700nm 處測定生成的無機磷量來確定該酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 【注】：全程操作需無磷環境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿， 避免磷污染。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、恒溫培養箱、分析天 平、可調式移液器。 四、土壤焦磷酸酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或者 37 度烘箱風干（需先粗研磨），過 40 目篩網備用。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30 min，調節波長到 700 nm，蒸餾水調零。 ② 反應 mix 制備：試劑四和五按照要求加蒸餾水溶解后，按試劑三：四：五=10:2:5 的比例依次混合配置（需現配現用，若出現藍色則需棄掉重新配置）。 ③ 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤樣本（g） 0.1 0.1 試劑一 550 550 試劑二 50 混勻，37℃振蕩培養 2 小時（間隔 30min 振蕩混勻一次） 試劑三 300 300 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再 加 3mL 蒸餾水，混勻溶解備用。 試劑三 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用甩幾下使試劑落入底部，再 加 4.2mL 蒸餾水，混勻溶解備用。 試劑五 粉體 mg×7 支 4℃保存 臨用甩幾下使試劑落入底部，每 支再加 1.5mL 蒸餾水，混勻溶解 備用，現配現用。 標準品 粉體 1 mL×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 50 立即混勻，于 12000rpm，室溫或 4℃離心 5min，上清液 需立即測定，不可久置。 ④ 顯色反應，在 EP 管或 1mL 玻璃比色皿中依次加入： 上清液 200 200 反應 mix 600 600 混勻，室溫靜置 15min，于 700nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（參看注意事項）。 【注】：1. 若△A 的值在零附近，可延長孵育時間 T（如增至 5h）。 2. 若是同時檢測同一背景下的土壤樣本（如同一批樣本不同時間點的取樣），此批土壤樣 本可做一個批次的樣本自身對照，節省時間。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.9007x - 0.0012；x 是標準品摩爾濃度（μmol/mL）， y 是△A。 2、活性定義：在 37℃，每克土壤每小時水解 1μmol 焦磷酸產生 1μmol 無機磷定義為 1 個 酶活單位。 土壤焦磷酸酶(μmol/h/g 土樣)=(△A+0.0012)÷0.9007×V1÷W÷T =0.5×(△A+0.0012)÷W V1---孵育階段整個反應體積：900μL=0.9mL； W---土壤樣品質量，g； T---催化反應時間，2 h； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（5μmoL/mL）：標準品用 10mL 蒸餾水溶解。（母液需在兩天內用）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0，0.2，0.4，0.6，0.8，1. μmol/mL。也可根 據實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據顯色反應階段測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。