土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)測試盒,微板法

土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)測試盒,微板法

土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)測試盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤甘*酸氨基肽酶（Solid-Glycine Aminopeptidase,S-GAP） 試劑盒說明書 （貨號: WS7430W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 土壤甘*酸氨基肽酶（S-GAP）是一類能水解肽鏈 N-末端為甘*酸的酶，由土壤微生 物分泌。本試劑盒利用土壤甘*酸氨基肽酶（S-GAP）分解甘*酸對硝基苯胺生成對硝 基苯胺，該物質在 405nm 有吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 S-GAP 活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存條件 備注 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 -20℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底 部，再加 5.4mL 乙醇混勻溶解。 試劑三 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫振蕩培養箱/水浴鍋、可調式移液器、天平。 四、土壤甘*酸氨基肽酶（S-GAP）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 400 500 400 試劑二 100 100 充分混勻，37℃培養 2 小時（振蕩培養或間隔 20min 手動振蕩混勻 幾下） 試劑三 300 300 300 混勻，8000rpm 離心 5min（若上清液不澄清可加大離心力），取 200μL 上清液至 96 孔板中，405nm 下讀取吸光值 A，△ A= A 測定- A 對照 -A 空白（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）。 則改變后 T 需代入計算公式重新計算。或對最后一步的待檢測上清液（包括測定管、對照管 和空白管）同時用蒸餾水進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.0077x - 0.0024；x 為標準品摩爾質量（nmol），y 為△A。 2、單位定義：每小時每克土樣生成 1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。 S-GAP(nmol/h/g 土樣)=(ΔA+0.0024)÷0.0077÷W÷T×D=65×(ΔA+0.0024)÷W×D T---反應時間，2h； W---土壤樣本實際取樣量，g。 D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10μmol/mL）：臨用前甩幾下或離心，使粉體落入底部，加入 0.5mL 乙醇，渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻，得到 10μmol/mL 備用。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度：0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根據實際樣本來 調整標準品濃度。 3 在 EP 管依次加入：50μL 標準品+450μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值，根據結果制作標準曲線。