土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)試劑盒

土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)試劑盒

土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤β-半乳糖苷酶（Solid-β-Galactosidase，S-β-GAL）試劑盒說明書 （貨號：WS8430F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 土壤β-半乳糖苷酶（β-GAL，EC 3.2.1.23)又稱β-D-半乳糖苷半乳糖基轉移酶，參與土 壤中碳水化合物的水解。 本試劑盒提供一種簡單，靈敏，快速的測定方法，β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳 糖苷生成對-硝基*酚（PNP），后者在405nm有吸收峰，通過測定吸光值升高速率來 計算β-GAL活性。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×1 瓶 -20℃保存 臨用前加入 4.5mL 蒸餾水，充分溶解 備用，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑二 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、臺式離心機、恒溫振蕩培養箱/水浴鍋、 可調式移液器、天平。 四、土壤β-半乳糖苷酶（S-β-GAL）酶活檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、測定步驟： ① 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 405nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 150 150 蒸餾水 150 試劑二 300 300 300 混勻， 37℃振蕩反應 1h 試劑三 350 350 350 混勻，12000rpm 室溫離心 10min，取全部上清液轉移至 1mL 玻璃比 色皿（光徑 1cm）中，405nm 下讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 對照-A 空白（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）。 則改變后 T 需代入計算公式重新計算。或對最后一步的待檢測上清液（包括測定管、對照管 和空白管）同時用蒸餾水進行稀釋，稀釋倍數 D 代入計算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線方程為 y = 0.1461x + 0.0087；x 為標準品質量（μg），y 為△A。 2、單位定義：每小時每克土樣中產生 1nmol 對-硝基*酚（PNP）定義為一個酶活單位。 S-β-GAL 活力(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.0087)÷0.1461÷Mr×103÷W÷T×D =49.2×(ΔA-0.0087)÷W×D T---反應時間，1h； W---實際稱取土樣質量，g； Mr--- PNP 相對分子質量，139.11； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根據實際 樣本來調整標準品濃度。 3 在 EP 管依次加入：20μL 標準品+130μL 蒸餾水+300μL 試劑二+350μL 試劑三，混勻， 全部上清液轉移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據結果制作標準曲線。