土壤精an酸脫氨酶活性測(cè)定試劑盒,微板法

土壤精an酸脫氨酶活性測(cè)定試劑盒,微板法

土壤精an酸脫氨酶活性測(cè)定試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤精*酸脫氨酶活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS0530W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 氮素是限制植物生長(zhǎng)發(fā)育的主要營(yíng)養(yǎng)元素之一，土壤氮素是植物氮素營(yíng)養(yǎng)的主要來(lái)源。 其中土壤精*酸脫氨酶也與土壤中氮轉(zhuǎn)化有著密切關(guān)系。 本試劑盒利用精*酸脫氨酶水解精*酸生成NH3-N，該產(chǎn)物在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽 和*酚反應(yīng)，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，通過(guò)檢測(cè)生成的有色物質(zhì)在630nm的光吸收峰， 進(jìn)而得出土壤精*酸脫氨酶活力大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格試劑名稱(chēng) 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前每瓶加入 18mL 蒸餾水，充分溶 解備用，用不完的試劑仍 4℃保存； 試劑二 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 避光保存。 試劑四 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 A：液體 3.5mL×2 瓶 B：液體μL×1 支 4℃保存 臨用前取 30μL 的 B 液進(jìn)一瓶 A 液中， 混勻后作為試劑五使用。混勻后的試 劑五一周內(nèi)用完。 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1 mL×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤精*酸脫氨酶活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本的制備： 取新鮮土樣風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過(guò) 40 目篩網(wǎng)，備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 培養(yǎng)：取 EP 管依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣(g) 0.5 0.5 試劑一 600 蒸餾水 600 混勻，放入 37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱中孵育 3 小時(shí) 試劑二 600 600 震蕩提取 30min，8000rpm，25℃離心 5min，取上清液。 ② 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 630nm。 ③ 顯色反應(yīng)：在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 上清液 15 15本試劑盒僅供科研使用 2 蒸餾水 45 45 試劑三 60 60 試劑四 30 30 試劑五 60 60 混勻，37℃放置 20min 后，于 630nm 讀取吸光值 A， ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管（每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】1. 試劑三和四和五需分開(kāi)加，不能事先混勻。 2. 若ΔA 值較小，可增加 37℃孵育時(shí)間 T（如由 3 小時(shí)增至 6 小時(shí)或更多）或在顯色反應(yīng)階 段增加上清液量 V1(如增至 30μL，則蒸餾水體積相應(yīng)減少)；則改變后的 T 和 V1 需代入 計(jì)算公式重新計(jì)算。 3. 若 A 測(cè)定的值大于 1.5，可在顯色反應(yīng)階段減少上清液的量 V1(如減至 5μL，則蒸餾水體 積相應(yīng)增加)；則改變后的上清液體積 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 5.0935x - 0.0031；x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（μg），y 為吸光值ΔA 。 2、土壤酶活定義：每天每克土樣中產(chǎn)生 1μg 的 NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。 土壤精*酸脫氨酶活力(μg/d/g 土樣)=(ΔA+0.0031)÷5.0935×(V÷V1)÷W÷T =125.7×(ΔA+0.0031)÷W V---反應(yīng)總體積，1200μL； V1---顯色反應(yīng)中上清液體積，15μL； T---反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； W---土壤樣本實(shí)際取樣質(zhì)量，g。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 把標(biāo)準(zhǔn)品母液（1mg/mL），用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，2，4，6，8， 10. μg/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 2 在顯色反應(yīng)階段，按照測(cè)定管加樣表操作，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。