土壤精an酸脫氨酶活性測定試劑盒

土壤精an酸脫氨酶活性測定試劑盒

土壤精an酸脫氨酶活性測定試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤精*酸脫氨酶活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS0530F 分光法 24 樣） 一、產品簡介： 氮素是限制植物生長發育的主要營養元素之一，土壤氮素是植物氮素營養的主要來源。 其中土壤精*酸脫氨酶也與土壤中氮轉化有著密切關系。 本試劑盒利用精*酸脫氨酶水解精*酸生成NH3-N，該產物在強堿性介質中與次氯酸鹽 和*酚反應，生成水溶性染料靛酚藍，通過檢測生成的有色物質在630nm的光吸收峰， 進而得出土壤精*酸脫氨酶活力大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加入 18mL 蒸餾水，充分溶 解備用，用不完的試劑仍 4℃保存； 試劑二 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 13mL×1 瓶 4℃保存 避光保存。 試劑四 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 A：液體 7mL×2 瓶 B：液體μL×1 支 4℃保存 臨用前取 60μL 的 B 液進一瓶 A 液 中，混勻后作為試劑五使用?；靹?后的試劑五一周內用完。 標準品 液體 1 mL×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、離心機、水浴鍋或恒溫培養箱、可調 式移液器、蒸餾水。 四、土壤精*酸脫氨酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本的制備： 取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網，備用。 2、上機檢測： ① 培養：取 EP 管依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土樣(g) 0.5 0.5 試劑一 600 蒸餾水 600 混勻，放入 37℃水浴鍋或恒溫培養箱中孵育 3 小時 試劑二 600 600 震蕩提取 30min，8000rpm，25℃離心 5min，取上清液。 ② 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 630nm。 ③ 顯色反應：在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管本試劑盒僅供科研使用 2 上清液 60 60 蒸餾水 180 180 試劑三 240 240 試劑四 120 120 試劑五 240 240 混勻，37℃放置 20min 后，于 630nm 讀取吸光值 A，全部 液體轉移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中 ΔA=A 測定管-A 對照管（每個樣本做一個自身對照）。 【注】1. 試劑三和四和五需分開加，不能事先混勻。 2. 若ΔA 值較小，可增加 37℃孵育時間 T（如由 3 小時增至 6 小時或更多）或在顯色反應階 段增加上清液量 V1(如增至 120μL，則蒸餾水體積相應減少)；則改變后的 T 和 V1 需代入 計算公式重新計算。 3. 若 A 測定的值大于 1.5，可在顯色反應階段減少上清液的量 V1(如減至 20μL，則蒸餾水 體積相應增加)；則改變后的上清液體積 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 1.9393x - 0.004；x 為標準品質量（μg），y 為吸光值ΔA 。 2、土壤酶活定義：每天每克土樣中產生 1μg 的 NH3-N 定義為一個酶活力單位。 土壤精*酸脫氨酶活力(μg/d/g 土樣)=(ΔA+0.004)÷1.9393×(V÷V1)÷W÷T =82.5×(ΔA+0.004)÷W V---反應總體積，1200μL； V1---顯色反應中上清液體積，60μL； T---反應時間，3h=1/8d； W---土壤樣本實際取樣質量，g。 附：標準曲線制作過程： 1 把標準品母液（1mg/mL），用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0，2，4，6，8， 10. μg/mL。也可根據實際樣本來調整標準品濃度。 2 在顯色反應階段，按照測定管加樣表操作，依據結果即可制作標準曲線。